第八章病原學(xué)診斷與防治

第一節(jié)  細(xì)菌學(xué)診斷

一、病原菌檢測(cè)

1.標(biāo)本(specimens):

2.細(xì)菌形態(tài)與結(jié)構(gòu)檢查：注意涂片鏡檢可初步診斷的病原菌。

3．分離與鑒定（isolation and identification): 確診最可靠的方法。

4．病原菌抗原的檢測(cè)（detection of bacterialantigens):

簡(jiǎn)便快速的診斷方法： 免疫熒光法 ( IF )，酶免疫測(cè)定（EIA)，放射免疫測(cè)定等。

5．其他檢測(cè)方法： 如分子生物學(xué)方法檢測(cè)細(xì)菌核酸： PCR ，核酸雜交。

二、 血清學(xué)診斷：用已知抗原檢測(cè)血清中未知抗體。

血清學(xué)診斷方法有多種：如：凝集試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、ELISA等。

第二節(jié)  病毒學(xué)診斷

一、標(biāo)本：

1.采集時(shí)間：發(fā)病初期或急性期；

2.采集部位：根據(jù)V感染部位，采取適宜標(biāo)本；

3.標(biāo)本送檢：冷藏速送

組織塊：置50%中性甘油鹽水中送檢。

4.

污染標(biāo)本：加抗生素處理。

二、病毒的分離、培養(yǎng)與鑒定（金標(biāo)準(zhǔn)，但方法復(fù)雜)

（一)病毒的分離

1．動(dòng)物接種

2．雞胚培養(yǎng)

3．細(xì)胞培養(yǎng)：最常用

病毒在細(xì)胞中生長(zhǎng)繁殖的指標(biāo)：

（1) 細(xì)胞病變效應(yīng)（cytopathic effect,CPE ): 有些病毒在細(xì)胞內(nèi)增殖時(shí)可引起細(xì)胞發(fā)生特有的形態(tài)學(xué)變化（細(xì)胞病變)，稱為細(xì)胞病變效應(yīng)（CPE )。

（2)包涵體 (inclusion body):

（3)紅細(xì)胞吸附：

（4)干擾現(xiàn)象：

（二)病毒數(shù)量與感染性的測(cè)定： 蝕斑測(cè)定法、TCID50測(cè)定法。

三、病毒感染的血清學(xué)診斷：

1．中和試驗(yàn)(neutralizing test)

2．血凝抑制試驗(yàn)(hemagglutinatia inhibitiontest, HI test)

四、病毒感染的快速診斷

（一)形態(tài)學(xué)檢查：

1．電鏡、免疫電鏡

2．光學(xué)顯微鏡：查包涵體

（二)病毒蛋白抗原檢測(cè)：免疫熒光法 (IF)、酶免疫測(cè)定（EIA)等

（三)特異性IgM抗體的檢測(cè)

（四)病毒核酸檢測(cè)：實(shí)時(shí)定量熒光PCR (real -timePCR)，RT- PCR， Gene chip

等。

第三節(jié)   真菌學(xué)診斷

一、標(biāo)本的采集：

二、病原真菌的檢查與鑒定： 形態(tài)學(xué)、分離培養(yǎng)。

1.直接鏡檢：

2.分離培養(yǎng)： 沙保氏培養(yǎng)基

三、 真菌的快速診斷：

 1.  血清學(xué)實(shí)驗(yàn)（ELISA、熒光抗體法)： 可用于深部真菌感染的輔助診斷。

 2.  核酸的檢測(cè)：PCR

 3． 真菌毒素的檢測(cè)

第四節(jié)   特異性預(yù)防與治療
一、人工主動(dòng)免疫

將疫苗及類毒素（抗原)接種于人體，使機(jī)體主動(dòng)產(chǎn)生獲得性免疫力。主要用于預(yù)防。

（一)疫苗

1. 死疫苗(killed vaccine):

2. 活疫苗(living vaccine)亦稱減毒疫苗(attenuatedvaccine):如： BCG、脊髓灰質(zhì)、麻疹等減毒活疫苗

3. 新型活疫苗:

4.基因工程疫苗: 利用基因工程方法獲得帶有病原體保護(hù)性抗原表位的目的基因，將其導(dǎo)入原核或真核表達(dá)系統(tǒng)，表達(dá)該種保護(hù)性抗原，提純后研制成疫苗 。

5. 重組載體疫苗

6. 合成疫苗

7. 亞單位疫苗(subunit vaccine)：利用微生物的某種表面結(jié)構(gòu)成分（抗原)制

成不含有中國(guó)衛(wèi)生人才網(wǎng)核酸、能誘發(fā)機(jī)體產(chǎn)生抗體的疫苗，稱m.bhskgw.cn/shiti/為亞單位疫苗 。

8.  DNA疫苗：又稱基因疫苗或核酸疫苗

9.轉(zhuǎn)基因植物疫苗

（二)類毒素(toxoid)：

  是外毒素經(jīng)0.3 %—0.4%甲醛處理后，失去毒性仍保持抗原性的生物制品。

二、人工被動(dòng)免疫

輸入含有特異性抗體的免疫血清、純化免疫球蛋白抗體或細(xì)胞因子等免疫制劑，使機(jī)體立即獲得特異性免疫力的過(guò)程叫人工被動(dòng)免疫。用于緊急預(yù)防或治療。

 1.抗毒素  (antitoxin) ：將類毒素或外毒素給馬進(jìn)行多次免疫后，待馬匹產(chǎn)生高效價(jià)抗毒素后采血，提取其免疫球蛋白精制成抗毒素。

  抗毒素主要用于外毒素所致疾病的治療和緊急預(yù)防。

臨床常用的有破傷風(fēng)抗毒素、白喉精制抗毒素等。

2. 抗菌血清

3. 胎盤丙種球蛋白

4．他免疫制劑：如 IFN, IL

三、細(xì)菌感染的治療：主要采用抗菌藥物。

（一)抗菌藥物的種類

（二)抗菌藥物的主要作用機(jī)制

 1．影響細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，

 2．影響細(xì)胞膜的功能，

 3．影響細(xì)菌細(xì)胞蛋白質(zhì)的合成

 4．影響核酸合成

四、病毒感染的治療

（一)抗病毒化學(xué)制劑

1. 核苷類藥物

(1) 無(wú)環(huán)鳥苷(acyclovir,ACV,) ：是目前最有效的抗皰疹病毒藥物之一。

  機(jī)制：競(jìng)爭(zhēng)病毒DNA復(fù)制酶。

(2) 拉米呋定(lamivudine) ：抑制慢性乙型肝炎患者體內(nèi)HBV的復(fù)制。

機(jī)制：抑制病毒逆轉(zhuǎn)錄酶。

2. 非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑 

nevirapine：是第一個(gè)新合成的非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑，1996年獲準(zhǔn)用于治療HIV。

3. 蛋白酶抑制劑：英迪納瓦(indinavir)是1996年批準(zhǔn)的新一代蛋白酶抑制劑，用于HIV。

4. 其他抗病毒藥物：

  金剛烷胺能阻止脫殼，主要用于治療甲型流感。

 (二)干擾素和干擾素誘生劑的應(yīng)用

1． 干擾素(IFN)

2． IFN誘生劑

3.  中草藥防治病毒感染

4.  基因治療(gene therapy)：

目前還處于研究階段

(1)反義寡核苷酸(antisense oligonucleotide, asON)：人工合成的，與靶基

因或mRNA某一區(qū)段互補(bǔ)的核酸片斷，可以通過(guò)堿基互補(bǔ)原則結(jié)合于靶基因/mRNA上,從而封閉基因的表達(dá)。包括：反義DNA，反義RNA， 其來(lái)源可有人工合成和體內(nèi)表達(dá)兩類。

(2) 核酶 (ribozyme)：是既能與靶基因序列結(jié)合又具酶活性的一類RNA分子。

(2)干擾RNA (shortinterfering RNA,siRNA)：一些小的雙鏈RNA可以高效、特

異的阻斷體內(nèi)特定基因表達(dá)，促使mRNA降解，誘使細(xì)胞表現(xiàn)出特定基因缺失的表型。

RNA干擾也是體內(nèi)抵御外在感染的一種重要保護(hù)機(jī)制。由于可以作為一種簡(jiǎn)單、有效的代替基因敲除的遺傳工具，RNAi正在功能基因組學(xué)領(lǐng)域掀起一場(chǎng)真正的革命。為此被Science評(píng)為2001年最重要的的成果之一。

五、真菌的治療

1.局部治療: 咪康唑霜、克霉唑軟膏等局部涂搽

2.全身用藥治療:  口服/靜脈用抗真菌藥，兩性霉素B、制霉菌素、咪康唑、酮康唑、氟康唑和伊曲康唑等