第25章  病毒感染的檢查方法與防治原則

復(fù)習(xí)提要

一、病毒感染的診斷

1．標(biāo)本的采集與送檢  標(biāo)本的采集是檢查成敗的關(guān)鍵。要在發(fā)病初期和急性期采集標(biāo)本，根據(jù)不同病毒感染部位采集標(biāo)本，1～2小時內(nèi)冷藏送檢。

    2．病毒分離培養(yǎng)的方法  病毒分離培養(yǎng)的方法有動物接種、雞胚接種和細(xì)胞培養(yǎng)�？蛇M(jìn)行形態(tài)學(xué)檢查（光鏡檢查、電鏡檢查)。

3．檢測病毒抗原及抗體的方法  檢查病毒抗原主要有免疫熒光技術(shù)、 ELISA、RIA等，檢測抗體主要有中和試驗、補(bǔ)體結(jié)合試驗、血凝抑制試驗和凝膠免疫擴(kuò)散試驗等。作病毒感染的血清學(xué)檢查，應(yīng)采集急性期和恢復(fù)期雙份血清，只有恢復(fù)期比急性期抗體效價增高 4倍以上，才有診斷意義。

4．檢測病毒核酸的方法  包括核酸雜交技術(shù)（斑點(diǎn)分子雜交、Southern印跡法、 Northern印跡法、原位分子雜交、芯片技術(shù))和PCR等。

二、病毒感染的防治原則

1．預(yù)防原則  人工免疫對于預(yù)防病毒感染有重要意義�？捎靡呙缱魅斯ぷ詣用庖�，這是預(yù)防病毒感染最重要和最有效的措施。目前常用的疫苗有滅活疫苗、減毒活疫苗、基因工程疫苗，正在研制開發(fā)核酸疫苗。人工被動免疫用于緊急預(yù)防，常用免疫血清、丙種球蛋白和轉(zhuǎn)移因子等。

2．抗病毒治療  目前主要采用核苷類藥物、病毒蛋白酶的抑制物、干擾素、中草藥等治療�？共《净�因治療和治療性疫苗正在研制之中。

試  題

【A型題】

1.不能用于病毒分離培養(yǎng)的方法是：

A.人工合成培養(yǎng)基培養(yǎng) B.動物接種

C.細(xì)胞培養(yǎng)  D.雞胚接種

E.器官培養(yǎng)

2.制備人類病毒疫苗最好選用：

A.原代細(xì)胞培養(yǎng) B.傳代細(xì)胞系培養(yǎng)

C.二倍體細(xì)胞株培養(yǎng) D.動物接種

E.雞胚培養(yǎng)

3.病毒血凝的機(jī)制是：

  A.紅細(xì)胞表面抗原和相應(yīng)的抗體結(jié)合

  B.紅細(xì)胞表面糖蛋白受體與病毒表面血凝素結(jié)合

  C.紅細(xì)胞表面的病毒抗原與相應(yīng)的抗體結(jié)合

  D.病毒與紅細(xì)胞表面的抗體結(jié)合

E.紅細(xì)胞吸附在宿主細(xì)胞上

4.檢測病毒抗體的三種方法是：

  A.中和試驗、補(bǔ)體結(jié)合試驗、血凝抑制試驗

  B.中和試驗、補(bǔ)體結(jié)合試驗、血凝試驗

  C.酶聯(lián)免疫吸附試驗、PCR、血凝抑制試驗

  D.中和試驗、血凝試驗、免疫電泳技術(shù)

  E.酶聯(lián)免疫吸附試驗、凝膠免疫擴(kuò)散試驗、PCR

5.對于病毒感染性疾病來說，起主導(dǎo)作用的預(yù)防措施主要是：

  A.用干擾素  B.疫苗接種

  C.用免疫血清D.隔離治療帶毒者

  E.使用核苷類藥物

6.目前已廣泛應(yīng)用于治療病毒感染的藥物或制劑是：

A.核苷類藥物B.反義寡核苷酸

C.核酶D.治療性疫苗

E.抗生素

7.能抑制病毒逆轉(zhuǎn)錄酶的活性的是：

A.金剛烷胺  B.無環(huán)鳥苷（ACV)

C.AZT D.干擾素

E.丙氧鳥苷

8.使用減毒活疫苗預(yù)防病毒性疾病時，哪一項不屬于潛在性的危險因素：

  A.回復(fù)為有毒力病毒B.進(jìn)入人體非尋常部位引起并發(fā)征

  C.活化其它潛伏病毒D.對宿主免疫系統(tǒng)刺激過強(qiáng)而引起免疫麻痹

  E.引起持續(xù)感染

9.目前尚未廣泛用于預(yù)防微生物感染性疾病的疫苗是:

A.類毒素 B.減毒活疫苗

C.滅活疫苗  D.核酸疫苗

E.基因工程疫苗

10.有關(guān)“滅活疫苗”的敘述，哪一項是錯誤的：

A.免疫途徑為注射  B.免疫次數(shù)為多次

C.細(xì)胞介導(dǎo)免疫良好D.不受其他病毒干擾

E.對溫度不敏感

11.通過疫苗接種已被消滅的疾病是:

  A.乙型腦炎 &nb醫(yī)學(xué)招聘網(wǎng)sp;B.天花

  C.麻疹D.小兒麻痹癥

  E.白喉

【X型題】

12.從可疑病例中分離病毒，采集標(biāo)本時應(yīng)注意的事項有:

A.采取急性期標(biāo)本  B.采集適當(dāng)部位的標(biāo)本

C.運(yùn)送標(biāo)本時要注意保溫（室溫) D.可采集早期與恢復(fù)期雙份血清

E.標(biāo)本應(yīng)盡快送檢

13.診斷病毒感染的方法有:

A.光學(xué)顯微鏡檢查  B.人工培養(yǎng)基分離培養(yǎng)

C.核酸檢測  D.患者急性期血清檢查

E.組織培養(yǎng)

14.既可檢測病毒抗原又可檢測抗體的方法有:

A.免疫電鏡檢查 B.酶聯(lián)免疫吸附試驗

C.免疫熒光技術(shù) D.PCR-ELISA法

E.放射免疫法

15.目前已廣泛用于臨床治療病毒感染性疾病的藥物有:

A.核苷類藥物B.病毒蛋白酶抑制劑

C.核酶D.特異免疫球蛋白

E.干擾素

16.目前在我國應(yīng)用減毒活疫苗預(yù)防的疾病有:

A.百日咳 B.麻疹

C.脊髓灰質(zhì)炎D.乙型肝炎

E.結(jié)核病

17.減毒活疫苗優(yōu)于滅活疫苗的原因主要有:

A.可在體內(nèi)繁殖 B.只需接種一次

C.免疫原性好D.免疫力維持時間長

E.易保存和運(yùn)輸

18.在我國目前用減毒活疫苗來預(yù)防的疾病是：

  A.脊髓灰質(zhì)炎B.流行性感冒

  C.腮腺炎 D.風(fēng)疹

  E.麻疹

[思考題]

19．采取分離病毒的標(biāo)本和血清學(xué)診斷的標(biāo)本各有何要求？病毒培養(yǎng)的方法主要有哪些？

20．簡述無環(huán)鳥苷、金剛烷胺、拉米夫定、齊多夫定抗病毒作用的機(jī)制。

參考答案

【A型題】

 1.A 2.C^* 3.B^*4.A 5.B^*

 6.A 7.C 8.D^* 9.D10.C

11.B

【X型題】

12.A B D E 13.A^* C^* D^* E^*  14.B C E

15.A^* B^*D^* E^*  16.B C E17.A^* B^* C^* D^* 18.A C D E

疑難解析

【題2】 制備人類病毒疫苗最好的細(xì)胞是人胚二倍體細(xì)胞，因為它是正常人體細(xì)胞，不像傳代細(xì)胞有致癌的潛能，同時二倍體細(xì)胞能在體外傳50～100代，產(chǎn)量大，不像原代和次代細(xì)胞培養(yǎng)傳代次數(shù)少，產(chǎn)量受限制。

【題3】 許多病毒能凝集雞、豚鼠、人等的紅細(xì)胞，稱為血凝現(xiàn)象。這種現(xiàn)象能被相應(yīng)抗體所抑制，稱血凝抑制試驗。病毒血凝的機(jī)制是紅細(xì)胞表面糖蛋白受體與病毒表面血凝素結(jié)合，引起紅細(xì)胞的凝集。

【題5】 對病毒性疾病的預(yù)防措施有控制傳染源、切斷傳播途徑和保護(hù)易感人群。目前尚無治療病毒感染特效藥物，有些核苷類藥物、免疫血清、干擾素、中草藥等能治療某些病毒感染，但預(yù)防效果有限，因此，用疫苗作人工主動免疫，對于預(yù)防病毒感染有重要意義。常用的疫苗有滅活疫苗、減毒活疫苗、亞單位疫苗、多肽疫苗和基因工程疫苗等。用減毒活疫苗作主動免疫，因其可在體內(nèi)增殖，與自然的亞臨床感染過程相似，并可引起局部SIgA的產(chǎn)生，產(chǎn)生比較穩(wěn)固持久的免疫，故在預(yù)防病毒感染中非常有效。

【題8】 目前疫苗接種對預(yù)防病毒性感染具有更重要意義。減毒活疫苗是由減毒的活病毒制成的疫苗，常采用將野生型病毒長時間連續(xù)傳代而獲得，如脊髓灰質(zhì)炎疫苗、麻疹疫苗和風(fēng)疹疫苗等。使用減毒活疫苗預(yù)防病毒性疾病時，潛在性的危險因素有毒力返祖、偶爾進(jìn)入人體非尋常部位引起并發(fā)征、活化其它潛伏病毒和引起持續(xù)感染等。

【題13】 病毒感染的檢測方法很多，主要有形態(tài)學(xué)檢測、抗原抗體檢測、核酸雜交技術(shù)和PCR技術(shù)等。通過光學(xué)顯微鏡可觀察病毒在細(xì)胞培養(yǎng)中引起的細(xì)胞病變，亦可直接檢測標(biāo)本中的包涵體。電子顯微鏡檢查可用于病毒量多、標(biāo)本易于采集的病毒�？乖�抗體檢測主要是檢測病毒抗原或血清中相應(yīng)的抗體，如酶聯(lián)免疫測定法（ELISA)可用于直接檢測某些病毒抗原和抗體，最常用的有“乙肝二對半試驗”。對許多病毒性感染的診斷，可將標(biāo)本接種于雞胚、組織細(xì)胞或動物體中進(jìn)行分離病毒，但病毒不能在人工培養(yǎng)基中生長。此外，核酸雜交技術(shù)和PCR技術(shù)可用來快速檢測病毒DNA或RNA。

【題15】 m.bhskgw.cn/jianyan/核苷類藥物經(jīng)磷酸化后可與核酸結(jié)合，競爭正常核酸前體所需的酶類，從而抑制病毒核酸的生物合成。干擾素是病毒刺激機(jī)體細(xì)胞產(chǎn)生的一種糖蛋白，具有廣譜抗病毒、抗腫瘤和免疫調(diào)節(jié)作用等。特異免疫球蛋白和病毒蛋白酶抑制劑也廣泛應(yīng)用于各種病毒性疾病的治療。以上抗病毒藥物或制劑在臨床上已得到廣泛應(yīng)用。核酶具有酶的催化作用，與特異性RNA以堿基配對方式結(jié)合，并通過特異的位點(diǎn)切割和降解靶RNA小分子，形象地稱之為分子剪刀，可用于抗病毒治療方案，但正在進(jìn)行深入探索。

【題17】 減毒活疫苗是通過連續(xù)快速傳代獲得的減毒變異株，能獲得良好的主動免疫效果。如脊髓灰質(zhì)炎減毒活疫苗（Sabin疫苗)是一種糖丸型口服疫苗，此疫苗在腸道中增殖，除血清中出現(xiàn)IgG抗體外，腸粘膜局部出現(xiàn)SIgA，能阻止病毒侵入血流，獲得與自然感染同樣的免疫效果。由于減毒活疫苗在腸道內(nèi)增殖并排出，可傳給周圍未服用疫苗的兒童，起到擴(kuò)大免疫范圍作用，免疫維持時間長。但減毒活疫苗有毒力返祖的危險性，保存、運(yùn)輸需冷藏。免疫缺陷者不宜使用。滅活疫苗（如Salk疫苗)不能口服，只用于肌肉注射，故不產(chǎn)生局部抗體，只在血清中出現(xiàn)抗體，需多次注射，免疫維持時間短，其優(yōu)點(diǎn)是便于保存及運(yùn)輸，無回復(fù)毒力的危險性且不良反應(yīng)小。