臨床免疫學及檢驗授課教案-實驗課教案:雙擴試驗

教研室

臨床免疫檢驗

課程

名稱

免疫學及檢驗

學時

4

檢驗專業(yè)2003 級   1、2、3班

帶教時間

2006 年9 月28日---2006   年 9 月 29 日

教師

姓名

王慧

職稱

主管技師

實檢（見習)項目

雙擴試驗

本次實驗

（見習)

目的、

要求

1．掌握凝集反應、沉淀反應的基本原理。

2．熟悉凝集反應、沉淀反應類型及特點。

3．熟悉體外抗原抗體反應臨床檢測意義。

內容與安排

學時

一、介紹本次實驗、見習的重點及安排

（實驗課應包括：1、實驗標本的采集，2、實驗操作步驟，

3、實驗操作過程注意事項，4、實驗結果的評價及臨床意義)

1、原理：將抗原和抗體分別加到瓊脂凝膠板上的小孔中，使兩者相互擴散，經一定時間后，若兩者特異性結合，在瓊脂孔間形成白色沉淀線。

2、器材與試劑

3、操作步驟：澆板→制備打孔器→打孔→固定、封底→加樣→溫育→觀察結果(24小時后)

4、注意事項

1)． 掌握好瓊脂的溫度

2)澆板時，瓊脂面要鋪平、無氣泡；澆好后要放置２分鐘凝固。

3)． 打孔時避免出現裂縫

4)加樣時避免樣品溢出孔外

5、結果的判斷:置室溫或37℃18～24h后，凝膠中各自擴散的抗原和抗體可在濃度比例適當處形成可見的沉淀線。根據沉淀線的形態(tài)和位置等進行分析判斷。

6、檢測的臨床意義：

1)應用于疾病的m.bhskgw.cn/Article/診斷及普查；

2)用于抗原抗體的免疫學分析：抗原或抗體的存在與否及其相對含量的估計沉淀線的形成是根據抗原抗體兩者比例所致；抗原或抗體相對分子量的分析抗原或抗體在瓊脂內自由擴散，其速度受分子量的影響。分子量小者擴散快，反之則較慢；用于抗原性質的分析兩種受檢抗原的性質完全相同、部分相同或完全不同；用于抗體效價的滴定雙向擴散技術是抗血清抗體效價滴定的常規(guī)方法。

7、方法學評價：操作簡便易行，特異性好;但敏感性較低。

8、學生分組試驗

二、討論思考題：

1、檢測抗血清效價的方法有哪些？

2、瓊脂雙擴散試驗主要可用于哪些方面？

3、試從不同角度分析瓊脂雙擴散試驗與單擴散試驗的區(qū)別？

三、小結要點

1、實驗操作情況

2、注意制板時瓊脂的溫度及澆板的動作要果斷迅速；打孔時避免瓊脂層脫離玻片底部，避免出現裂縫。

3、實驗結束后于第二于下午觀察試驗結果

四、布置學生作業(yè)內容

1、書寫實驗報告(包括：實驗目的、原理、器材和試劑、操作步驟、注意事項、、方法學評價、實驗結果、結果分析及結論、討論)

2、思考題

五、下次實驗（見習)課預習范圍及后續(xù)程介紹

下次實驗課內容為：ELISA檢測乙型肝炎病毒標志物

預習內容：什么是ELISA？ELISA試驗可有哪些類型？

4學時

教案制定時間： 2006   年 月 日   帶教老師簽名：王慧

專業(yè)主任審閱意見；

   簽名：  年   月   日