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1 材料與方法
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、模型制備及分組
健康雄性清潔級(jí)SD大鼠80只，體重(200±20)g，飼養(yǎng)于西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF中心。隨機(jī)抽出16只大鼠，作為空白組(A組，n=16)，尾靜脈注射等容量生理鹽水;余下的64只大鼠一次性尾靜脈注射阿霉素6mg/kg體重，制備病理模型，3周后50只造模成功。剔除死亡及不合格模型動(dòng)物后，將50只AN大鼠隨機(jī)分為：模型組(B組，n=10)、祛風(fēng)通絡(luò)方組(C組，n=10)、激祛組(激素和祛風(fēng)通絡(luò)方共用，D組，n=10)、激素組(E組，n=10)、苯那普利組(F組，n=10)。第3周起各組每日灌胃1次：A組和B組蒸餾水2mL;C組祛風(fēng)通絡(luò)方(含生藥2.1g/mL)藥液1mL和蒸餾水1mL;D組強(qiáng)的松(25mg/kg)藥液1mL和祛風(fēng)通絡(luò)方藥液1mL;E組強(qiáng)的松藥液1mL和蒸餾水1mL;F組苯那普利(0.34mg/kg)1mL和蒸餾水1mL。將空白組和模型組各處死8只大鼠，監(jiān)測(cè)相應(yīng)指標(biāo)。實(shí)驗(yàn)期間每周檢測(cè)尿蛋白1次，造模成功及實(shí)驗(yàn)結(jié)束后各檢測(cè)1次血清生化指標(biāo)、超微結(jié)構(gòu)及AS的變化。
1.2 主要試劑及設(shè)備醫(yī).學(xué)全.在.線(xiàn)網(wǎng)站m.bhskgw.cn
中藥，西安易圣堂大藥堂;醋酸強(qiáng)的松，西安利君制藥有限公司;苯那普利，北京諾華制藥有限公司;阿霉素，浙江海正藥業(yè)有限公司;聚乙烯亞胺(polyethyleneimine, PEI)，美國(guó)Sigma公司;H-600透射電子顯微鏡，日本日立公司。
1.3 尿蛋白及血清學(xué)指標(biāo)的測(cè)定
用鄰苯三酚紅/鉬酸鹽測(cè)定24h尿蛋白定量;用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清白蛋白(ALB)、血脂(TCH、TG)和腎功(Bun、Cr)。
1.4 透射電鏡觀察
1.4.1 腎小球超微結(jié)構(gòu)的觀察
取約1mm×1mm×1mm的腎皮質(zhì)組織塊，25mL/L戊二醛4℃固定，10g/L四氧化鋨酸后固定，乙醇梯度脫水，環(huán)氧樹(shù)脂與丙酮包埋，聚合成塊，超薄切片(50～70nm)后醋酸鈾-檸檬酸鉛染色，透射電鏡觀察、攝片。
1.4.2 腎小球基底膜上AS的檢測(cè)
取1mm×1mm×1mm新鮮腎皮質(zhì)，5g/L PEI浸泡染色30min，二甲胂酸鈉緩沖液沖洗;用戊二醛-磷鎢酸混合液常溫固定30min，鋨酸后固定;脫水、包埋、聚合，超薄切片，透射電鏡觀察、攝片。AS計(jì)數(shù)時(shí)只用GBM平直的片段，從測(cè)定的GBM長(zhǎng)度和計(jì)數(shù)的AS數(shù)，計(jì)算出平均每1000nm GBM內(nèi)、外疏松層上的AS數(shù)。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。計(jì)數(shù)資料用(±s)表示，組間比較采用兩因素方差分析，多重比較采用LSD法，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié) 果
2.1 24h尿蛋白定量醫(yī).學(xué)全.在.線(xiàn)網(wǎng)站m.bhskgw.cn
阿霉素尾靜脈注射后，模型組大鼠的24h尿蛋白定量逐漸增多。3周時(shí)與空白組比較，造模組大鼠的24h尿蛋白明顯升高(P<0.01)，提示造模成功(表1)。造模組大鼠第3周起給予相應(yīng)干預(yù)，每周尿蛋白水平變化見(jiàn)表2。表1 大鼠造模成功前每周尿蛋白的變化(略)與空白組比較，^P<0.01。表2 大鼠造模成功后各組每周尿蛋白的變化(略)
2.2 生化檢測(cè)結(jié)果
3周時(shí)與空白組比較,AN組大鼠的ALB降低，TCH與TG明顯升高(P<0.01，表3);第7周干預(yù)結(jié)束后，各組大鼠血液生化指標(biāo)見(jiàn)表4。與B組比較，C組ALB有一定程度上升，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，E組ALB下降明顯(P<0.05);各干預(yù)組TCH均有明顯改善(P<0.05);各干預(yù)組TG下降不明顯，激素組反呈現(xiàn)明顯升高趨勢(shì)(P<0.05)。表3 大鼠造模成功時(shí)血清生化指標(biāo)的變化(略)與空白組比較，^P<0.01。A：空白組;B：模型組。表4 各組大鼠7周時(shí)血液生化指標(biāo)的變化(略)
