天花粉蛋白

    1.致流產(chǎn)和抗早孕作用
用天花粉蛋白粗制劑,給孕期10～20d小鼠每只皮下注射0.2mg,五d后解剖,記錄胎仔總數(shù)及死仔數(shù)(包括吸收點)計算有效率在75%以上,給5只孕期30d以上的犬肌注0.5mg/kg,能命名胎犬死亡并娩出,給孕期14d左右的每只兔肌注4mg或陰道內(nèi)給藥32mg,5～7d后剖腹檢查,也有致流產(chǎn)作用,體外培養(yǎng)試驗,對孕期5d的兔胚泡有損傷作用:注射于早孕兔亦有明顯明顯抗早孕效果,可使胚泡壞死、液化,終致完全吸收。
經(jīng)I-天花粉粗提物在孕婦體內(nèi)的分布與排泄試驗,間接熒光標(biāo)記抗體法追蹤妊娠小鼠體內(nèi)不同時間的天花粉蛋白抗原分布動態(tài),獼猴及人流產(chǎn)胎盤的病理學(xué)觀察和臨床病理現(xiàn)象分析,天花粉蛋白對體外培養(yǎng)人胎盤絨毛滋養(yǎng)層細(xì)胞形態(tài)和功能損傷的觀察,天花粉蛋白引產(chǎn)前后血清內(nèi)絨毛膜種性腺激素(雙抗體免疫法)及尿中孕二醇、雌三醇(氣相層析法)的含量測定,以及抑制內(nèi)源前列腺合成對天花粉蛋白引產(chǎn)的影響等方面的研究結(jié)果,互相驗證,可對天花粉蛋白的致流產(chǎn)作用原理歸納如下:天花粉蛋白直接作用于胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞,并有一定的細(xì)胞專一性;能選擇地使胎盤絨毛合體滋養(yǎng)層細(xì)胞變性壞死,解體的細(xì)胞碎片留在血竇中引起凝血,造成循環(huán)障礙和進(jìn)一步的大量組織壞死:胎盤絨毛的損傷反映在功能方面,即絨毛膜促性腺激素和類固醇激素迅速下降到先兆流產(chǎn)的臨界水平以下,由于胎盤形態(tài)和功能嚴(yán)重?fù)p傷的結(jié)果,破壞了母體和胎兒之間的內(nèi)分泌聯(lián)系的代謝物的交換,使胎兒死亡,并假定可能通過尚未清楚的機制引起前列腺素合成增加,發(fā)動宮縮而導(dǎo)致流產(chǎn)。天花粉蛋白能使小鼠離體子宮、兔在體子宮及慢性子宮瘺管收縮增強,并能提高子宮對垂體后葉素的敏感性,故認(rèn)為其對子宮平滑肌有直接興奮作用,可能也是導(dǎo)致流產(chǎn)的因素之一。注射用天花粉能促進(jìn)妊娠后期大鼠娩出胎鼠并增強其在位子宮的自發(fā)活動。該藥物提高妊娠大鼠子宮PGF2α含量,對動物血漿和子宮孕酮濃度則無明顯影響,可見該藥促進(jìn)子宮PGF2。合成和釋放是增強妊娠子宮自發(fā)活動的重要原因。
2.免疫學(xué)影響
(1)對肥大細(xì)胞脫顆粒和組胺釋放的影響
首先用Alcian藍(lán)染色的肥大細(xì)胞脫顆粒試驗和用熒光測定組胺的方法觀察了天花粉蛋白對肥大細(xì)胞脫顆粒和組胺釋放的影響。結(jié)果表明:①在體外試驗中,不論有無血清的存在,天花粉蛋白都不引起肥大細(xì)胞的脫粒和組胺釋放。②天花粉蛋白的體內(nèi)用藥,能引起B(yǎng)alb/c小鼠炎癥局部的肥大細(xì)胞脫顆粒和組胺水平的明顯提高。③腹膜腔內(nèi)注射天花粉蛋白后,WISTATR大鼠腹膜腔內(nèi)蛋白明顯滲出,同時全血組胺水平也明顯提高。④上述天花粉蛋白誘導(dǎo)的腹腔滲出液具有明顯的肥大細(xì)胞脫顆粒作用,⑤用眼鏡蛇毒素完全耗竭小鼠的補體對天花粉蛋白引起的肥大細(xì)胞脫粒因子的產(chǎn)生無明顯影響,可見,天花粉蛋白的體內(nèi)應(yīng)用能通過激活某些可溶性成分的產(chǎn)生而引起肥大細(xì)胞的脫顆粒和組胺的釋放,但這一過程與天花粉蛋白激活補體的作用無明顯關(guān)系。
(2)對激肽系統(tǒng)的激活作用
天花粉蛋白對激肽系統(tǒng)有激活作用,實驗組激肽釋放酶活力單位為190±14mμ/ml,對照組為149±14mμ/ml,P<0.01;天花粉蛋白裂解片段CBTf1同樣可以激活激肽系統(tǒng),而CBTf2對激肽系統(tǒng)無影響。天花粉蛋白引起臨床過敏反應(yīng)及類過敏反應(yīng)可能與激肽系統(tǒng)的激活有關(guān)。
(3)誘發(fā)人體免疫抑制的遺傳控制
去除CD8陽性細(xì)胞或作相應(yīng)單抗的封阻,可使天花粉蛋白體外誘發(fā)的免疫低反應(yīng)得到回復(fù),然而這一現(xiàn)象僅見于一部分受試者,對其余受試者清除或封阻CD8細(xì)胞后低反應(yīng)保持不變甚至略有加劇,正常人因而區(qū)分為cd8介導(dǎo)型(M+)及非介導(dǎo)型(M－)兩類個體。進(jìn)一步研究表明:①M+和M-是可重復(fù)的穩(wěn)定性狀。②這一區(qū)分僅見于同種異體免疫應(yīng)答而非PHA誘發(fā)的細(xì)胞增殖。③只有MLR反應(yīng),細(xì)胞一方去除CD細(xì)胞方能顯示上述差異與刺激細(xì)胞遺傳背景及是否帶有CD8細(xì)胞無關(guān)。④天花粉蛋白致敏細(xì)胞作短期培養(yǎng),僅M+個體上清液顯示免疫抑制活性。
根據(jù)CD8陰性細(xì)胞在天花粉蛋白作用下是否表達(dá)抑制功能,將68名隨機正常人區(qū)分為21名CD8介導(dǎo)型個體(M+)和47名非介導(dǎo)型個體(M一),介導(dǎo)系數(shù)均值分別為13.4和-5.6。根據(jù)群體中介導(dǎo)系數(shù)變異的雙峰性分布,推斷M+的M-所顯示的免疫學(xué)特征屬于單基因控制的遺傳性狀,相應(yīng)等位基因頻率分別為0.1686和0.8314。由于M-在天花粉蛋白作用下不顯示CD8參與的免疫低反應(yīng)性,該類個體免疫應(yīng)答強度應(yīng)高于 M+,經(jīng)測定,兩者相對反應(yīng)值相差12.5%～12.7%。
3.抗癌作用
臨床證實,天花粉蛋白對胎盤滋養(yǎng)葉細(xì)胞腫瘤有一定療效。腹腔注射5mg/kg,對小鼠實驗性肝癌腹水型也有一定治療作用,可減少腹水量,延長存活期;對移植性肝癌實體瘤也有輕度抑制作用。精制天花粉蛋白和結(jié)晶天花粉蛋白對離體絨癌細(xì)胞增殖有抑制作用,其中精制天花粉蛋白的IC50 為16.0μg/ml,結(jié)晶天花粉蛋白IC50 為3.3μg/ml。
4.體內(nèi)過程
據(jù)I-天花粉粗提物在孕婦或獼猴體內(nèi)的分布與排泄、間接熒光標(biāo)記抗體法或整放射自顯影法追蹤妊娠小鼠體內(nèi)不同時間的天花粉蛋白抗原或I標(biāo)記的天花粉蛋白分布動態(tài),放射免疫法測定孕婦血清或孕猴體內(nèi)天花粉蛋白抗原成分的分布,以及惡性葡萄胎患者靜脈滴注I-天花粉粗提物等試驗結(jié)果,揭示天花粉蛋白肌注后10min即在血清中出現(xiàn),4h后局部存留量約為給藥量的3/5,24h后只有給藥量的3/10左右。肌注1h后以腎皮質(zhì)和腸內(nèi)糞便含量為最高,其次為胎盤組織,而肝、脾、肺中含量較低,超過16h則表現(xiàn)為游離碘的分布特點。子宮肌、胎兒肝組織及紅血球亦均含有天花粉蛋白,但羊水內(nèi)并無滲入。血清中天花粉蛋白于肌注后4h達(dá)高峰,此時血循環(huán)中出現(xiàn)的瞬時最大總量近似于肌注量的5%,第8h已遞減一半,第24h僅有高峰量的1/7。肌注16h后,除腎皮質(zhì)外,其他組織中含量均已很少。經(jīng)尿排泄的高峰出現(xiàn)時間與血高峰濃度出現(xiàn)時間基本一致,且未被降解。靜脈內(nèi)給藥后,在血循環(huán)中消失一半所需的時間約為1h。先是肝臟濃度很高,而后腎臟與膽汁中含量上升。24h內(nèi)經(jīng)尿總排出率可達(dá)67%。羊膜腔內(nèi)注射時,母體血清中檢測不出天花粉蛋白,經(jīng)尿排出量甚少,大多保留在腔內(nèi),直到流產(chǎn)時才隨羊水排出體個,流產(chǎn)后測定羊水、羊膜、平滑絨毛和胎盤中I標(biāo)記的天花粉蛋白,隨解剖學(xué)位置由內(nèi)向外含量逐漸降低,且胎兒血清中也含有一定量以上材料說明,天花粉蛋白肌注容易吸收;經(jīng)靜脈給藥,開始集中在肝臟,而后經(jīng)腎臟和膽汁排泄,藥物及其代謝產(chǎn)物從體內(nèi)清除較為迅速。羊膜腔內(nèi)給藥,天花粉蛋白只能緩慢地透過羊膜和胎盤屏障,進(jìn)入母體血循環(huán)的量甚小,故全身副反應(yīng)也比靜脈給藥及肌注為輕。雖然天花粉蛋白對細(xì)胞的結(jié)合專一性并不很強,但無論靜脈給藥、肌注及羊膜腔內(nèi)注射,其在胎盤上均有一定的選擇性積累,且能迅速進(jìn)入胎兒組織。