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表達(dá)人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子的酵母重組株及rhGM-CSF的純化方法

公開(kāi)(公告)號(hào) CN1268751C  
公開(kāi)(公告)日 2006.08.09  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN03137202.3  
申請(qǐng)日期 2003.05.26  
專利名稱 表達(dá)人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子的酵母重組株及rhGM-CSF的純化方法  
主分類號(hào) C12N15/63(2006.01)I  
分類號(hào) C12N15/63(2006.01)I;C12N15/81(2006.01)I;C12N1/19(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N15/27(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C07K14/535(2006.01)I;C07K1/36(2006.01)I;C12R1/84(2006.01)N  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán)  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 海南國(guó)棟藥物研究所有限公司  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 梁國(guó)棟;周 鵬;夏中寧;蒲廣西;陳海寧  
地址 570216海南省?谑薪鸨P(pán)工業(yè)區(qū)金盤(pán)路17號(hào)嘉海大廈三樓  
頒證日  
國(guó)際申請(qǐng)  
進(jìn)入國(guó)家日期  
專利代理機(jī)構(gòu)  
代理人  
國(guó)省代碼 海南;66  
主權(quán)項(xiàng) 一種表達(dá)重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子的分泌型表達(dá)載體,其特征在于,該載體含有:重組的rhGM-CSF序列,其被插入pGAPZα-A之GAP啟動(dòng)子/α-factor信號(hào)肽下游位點(diǎn)Xhoi/Xbai,同時(shí)刪除Kex2位點(diǎn)之后的Glu-Ala-Glu-Ala編碼序列和啟始密碼子ATG,構(gòu)建成rhGM-CSF分泌型表達(dá)載體。  
摘要 本發(fā)明公開(kāi)了一種重組人粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rhGM-CSF)的分泌型表達(dá)載體和一種簡(jiǎn)易純化方法,用該分泌型表達(dá)載體轉(zhuǎn)化的宿主細(xì)胞,以及用上述表達(dá)載體的畢赤氏酵母重組工程菌株發(fā)酵表達(dá)rhGM-CSF的方法。本發(fā)明采用酵母分泌表達(dá)系統(tǒng)取代大腸桿菌包涵體表達(dá)系統(tǒng),目標(biāo)蛋白rhGM-CSF不需要復(fù)性,其生物比活性可達(dá)到3.4×107單位/毫克蛋白,低毒副作用;因此,本發(fā)明的方法制得的rhGM-CSF不僅產(chǎn)率高,而且純化工藝簡(jiǎn)便、成本低、產(chǎn)品毒副作用低。  
國(guó)際公布  
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