公開(kāi)(公告)號(hào)
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CN1259337C
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公開(kāi)(公告)日
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2006.06.14
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申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào)
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CN02120821.2
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申請(qǐng)日期
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2002.06.04
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專(zhuān)利名稱(chēng)
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人甲狀旁腺激素基因突變體合成、表達(dá)、制備及應(yīng)用
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主分類(lèi)號(hào)
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C07K14/635(2006.01)I
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分類(lèi)號(hào)
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C07K14/635(2006.01)I;C12P21/02(2006.01)I;C12N15/12(2006.01)I;C12N15/63(2006.01)I;A61K38/29(2006.01)I;A61P19/10(2006.01)I;A61P19/08(2006.01)I;A61P3/00(2006.01)I
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分案原申請(qǐng)?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人
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北京雙鷺?biāo)帢I(yè)股份有限公司
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發(fā)明(設(shè)計(jì))人
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徐明波;王勇波;崔鐵民;李亞軍;王紅麗;袁雪蓮;張 蕊
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地址
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100041北京市石景山區(qū)八大處高科技園區(qū)
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頒證日
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國(guó)際申請(qǐng)
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進(jìn)入國(guó)家日期
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專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu)
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代理人
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國(guó)省代碼
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北京;11
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主權(quán)項(xiàng)
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一種制備人甲狀旁腺激素的方法,包括:(1)合成一條編碼人甲狀旁腺激素的基因,所述基因具有表1所示的核苷酸序列;(2)將(1)得到的基因序列克隆到原核表達(dá)載體中;(3)用(2)所述的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化原核細(xì)胞得到工程菌;(4)通過(guò)發(fā)酵技術(shù)擴(kuò)增(3)中所得到的工程菌,得到人甲狀旁腺激素的高水平表達(dá)。
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摘要
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本發(fā)明涉及一種重組人甲狀旁腺激素(Parathyriod Hormone,簡(jiǎn)稱(chēng)PTH)的制備方法。本發(fā)明利用遺傳密碼的兼并性,設(shè)計(jì)了大腸桿菌偏愛(ài)的密碼子,降低了DNA序列中的GC含量,合成了PTH的DNA序列。將PCR擴(kuò)增的人PTH基因與原核表達(dá)載體如pET22b組裝成高效表達(dá)質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化大腸桿菌后用誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)PTH基因表達(dá),表達(dá)量達(dá)到菌體總蛋白的25-30%。工程菌經(jīng)發(fā)酵擴(kuò)增,破碎后保留上清。上清經(jīng)處理后,進(jìn)行離子交換層析和凝膠排阻層析二步法純化產(chǎn)品。純品加保護(hù)劑后制成藥用凍干制劑。該制劑可用于由骨代謝病、骨質(zhì)疏松所引起的各類(lèi)疾病的治療。
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國(guó)際公布
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