| 公開(公告)號 | CN1242063C |
| 公開(公告)日 | 2006.02.15 |
| 申請(專利)號 | CN200310108141.7 |
| 申請日期 | 2003.10.24 |
| 專利名稱 | 具有綠色熒光蛋白示蹤和抗性篩選標(biāo)記的RNAi載體pGO |
| 主分類號 | C12N15/63(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/63(2006.01)I;C12N15/79(2006.01)I;A61K48/00(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 王紅陽;鄢和新;張 瑞;陳 磊;吳孟超 |
| 地址 | 200433上海市楊浦區(qū)翔殷路800號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 上海新天專利代理有限公司 |
| 代理人 | 丁振英 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種RNAi載體pGO，制備方法如下：(1)將pEGFP-C2載體用同尾酶BglII和BamHI雙酶切切除EGFP和SV40polyA之間多個(gè)常用酶切位點(diǎn)BglII、XholI、HindIII、EcoRI、SalI、BamHI，保留酶切位點(diǎn)MluI及主要構(gòu)件pUC復(fù)制起點(diǎn)pUCori、f1復(fù)制起點(diǎn)flori、細(xì)菌啟動(dòng)子P、卡那霉素基因/新霉素抗性基因Kan/Neo、HSV-TKPolyA、CMV啟動(dòng)子、增強(qiáng)綠色熒光蛋白基因EGFP、SV40PolyA、SV40早期啟動(dòng)子；(2)以HEK293細(xì)胞基因組DNA為模板，用上游引物5’-CCGACGCGTAGATCTAAGGTCGGGCAGGAAGAG-3’和下游引物5’-CCGACGCGTCTCGAGGAATTCGGATCCGTCGACAAAAAGAAGACCACGGTGTTTCGTCCTTTC-3’擴(kuò)增人源U6啟動(dòng)子，其中在上游和下游引物中分別引入MluI酶切位點(diǎn)，在下游引物中引入多克隆位點(diǎn)XhoI、EcoRI、BamHI、SalI和BbsI；(3)將人源U6啟動(dòng)子經(jīng)MluI酶切后插入上述(1)改造后pEGFP-C2的酶切位點(diǎn)MluI，即得pGO。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及醫(yī)藥分子生物學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，是一種可用于特異性抑制靶基因表達(dá)的具有綠色熒光蛋白示蹤和真核細(xì)胞抗性篩選標(biāo)記的RNA干擾(RNAi)載體pGO。本發(fā)明RNAi載體pGO是對pEGFP-C2載體的改造，去除了其原有的多克隆位點(diǎn)，在SW0 polyA和f1原核復(fù)制起點(diǎn)之間插入帶有相應(yīng)多克隆位點(diǎn)的U6啟動(dòng)子構(gòu)成。只要在U6啟動(dòng)子下游的多克隆位點(diǎn)中的適當(dāng)位點(diǎn)插入針對靶基因的siRNA模板，轉(zhuǎn)染細(xì)胞后就可特異并有效地抑制該基因的表達(dá)。因而本發(fā)明的RNAi載體pGO可用于制備研究基因功能的試劑或用于抗腫瘤藥物的研究和開發(fā)。 |
| 國際公布 |
