| 公開(公告)號 | CN1212332C |
| 公開(公告)日 | 2005.07.27 |
| 申請(專利)號 | CN03137647.9 |
| 申請日期 | 2003.06.19 |
| 專利名稱 | 一種核糖核酸的制備方法 |
| 主分類號 | C07H21/02 |
| 分類號 | C07H21/02 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 威世藥業(yè)（如皋)有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 張永深;張燕軍 |
| 地址 | 226500 江蘇省如皋市普慶路139號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 向華 |
| 國省代碼 | 江蘇;32 |
| 主權(quán)項 | 一種核糖核酸的生產(chǎn)方法，其特征在于該方法包括下述步驟：(1)勻漿：取100重量份鮮肝，用水洗凈，瀝干，用絞肉機絞碎鮮肝，鮮肝與SSCpH7.0溶液以體積/重量計按比例1∶0.8-2.2攪拌混合，膠體磨勻漿，料液離心分離，取上清液，過濾得到70-210體積份的濾液；(2)取步驟(1)的濾液，加入7-21體積份SDS溶液，攪拌，再加入23-100體積份80-90％苯酚溶液，再攪拌，再加入23-100體積份氯仿，攪拌，料液離心分離，回收上清液；(3)取步驟(2)的上清液，加入5-20體積份20％乙酸鉀溶液，混勻，再加入80-420體積份乙醇，至乙醇濃度為70％，混勻，自然沉降，離心分離得到沉淀物；(4)用12體積份乙酸鈉復(fù)溶液溶解步驟(3)的沉淀物，再加入2-11體積份80％苯酚，攪拌，再加入2-11體積份氯仿，攪拌，再離心分離，回收取上清液；(5)取18體積份的步驟(4)的上清液，加入1.8-12體積份80％苯酚，攪拌，再加入1.8-12體積份氯仿，攪拌，離心分離，回收取上清液；(6)取步驟(5)上清液，加入2-14體積份氯仿，攪拌，離心分離，回收取上清液；(7)往步驟(6)的上清液，加入95％乙醇至乙醇濃度為70％，混勻，自然沉淀，傾去上清液，離心分離得RNA粗品；(8)用13體積份K2HPO4溶液溶解上述RNA粗品得到溶解液，然后加入5-10體積份乙二醇甲醚，離心得到上清液；(9)取步驟(8)上清液，再加入5-8體積份乙酸鈉溶液，混勻，然后再加入2-4.5體積份加入CTAB溶液，混勻，沉淀，離心，得到沉淀物；(10)取步驟(9)的沉淀物，用10體積份的乙酸鈉溶液溶解，再加入95％乙醇至濃度為70％，棄去上清液，沉淀離心分離，重復(fù)該步驟3-4次，這樣得到RNA產(chǎn)品，其中：所述的SSCpH＝7.0溶液是用5.85克氯化鈉、14.7克檸檬酸鈉、5克皂土加純化水至1升后，再用冰醋酸調(diào)節(jié)到pH＝7.0制備得到的；所述的SDSpH＝9.0溶液是用50克SDS、133毫升TEA、4.0克EDTA加純水至1升后，再用冰醋酸調(diào)節(jié)到pH＝9.0制備得到的；所述的80％苯酚溶液是將800毫升苯酚和1克8-羥基喹啉用純水溶解至1升得到的；所述的乙酸鈉復(fù)溶液是用13.6克乙酸鈉、5.0克SDS、13.3毫升TEA、0.8克EDTA加純化水至1升后，再用冰醋酸調(diào)節(jié)到pH＝7.0制備得到的；所述的乙酸鈉溶液是用13.6克乙酸鈉、0.8克EDTA加純化水至1升后，再用冰醋酸調(diào)節(jié)到pH＝7.0制備得到的；所述的K2HPO4溶液是用注射用水溶解296.7克K2HPO4.H2O和0.8克EDTA，再用磷酸調(diào)節(jié)到pH＝8.0制備得到的；所述的CTBA溶液是用注射用水溶解30克CTBA，再用水調(diào)至1升制備得到的。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種核糖核酸的制備方法，該方法對現(xiàn)有技術(shù)作出了多方面的改進。因此，該方法不但提高了RNA生產(chǎn)效率，而且還能保證產(chǎn)品的質(zhì)量和得率，顯著地降低了生產(chǎn)成本，大大提高了經(jīng)濟效益。 |
| 國際公布 |
