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用于測(cè)序的改變的熱穩(wěn)定DNA聚合酶

公開(公告)號(hào) CN1197962C  
公開(公告)日 2005.04.20  
申請(qǐng)(專利)號(hào) CN98124526.9  
申請(qǐng)日期 1998.09.11  
專利名稱 用于測(cè)序的改變的熱穩(wěn)定DNA聚合酶  
主分類號(hào) C12N9/12  
分類號(hào) C12N9/12;C12N9/22;C12N15/09;C12N15/52;C12N15/54;C12N15/64;C12Q1/68;//(C12N9/12,C12R1:07)  
分案原申請(qǐng)?zhí)?  
優(yōu)先權(quán) 1997.9.11 US 058525  
申請(qǐng)(專利權(quán))人 霍夫曼-拉羅奇有限公司  
發(fā)明(設(shè)計(jì))人 戴維·H·蓋爾芬德;莉薩·V·卡爾曼  
地址 瑞士巴塞爾  
頒證日  
國際申請(qǐng)  
進(jìn)入國家日期  
專利代理機(jī)構(gòu) 北京市柳沈律師事務(wù)所  
代理人 黃益芬  
國省代碼 瑞士;CH  
主權(quán)項(xiàng) 重組的熱穩(wěn)定DNA聚合酶,其特征在于a)所述聚合酶的天然形式包括SEQIDNO:1所示基酸序列LeuSerXaaXaaLeuXaaXaaProXaaXaaGlu,其中在該序列的3,6,9和10位的“Xaa”是任何的氨基酸序列,在所述序列第4位的“Xaa”是極性氨基酸,并且在該序列的第7位的“Xaa”是Val或Ile;b)與所述天然序列相比,第4位所述的“Xaa”被突變?yōu)長(zhǎng)ys,Arg或His;和c)與所述聚合酶的天然形式相比,所述熱穩(wěn)定DNA聚合酶降低了對(duì)摻入帶有熒光素族染料標(biāo)記的核苷酸的辨別力大小。  
摘要 提供了摻入非常規(guī)核苷酸例如用熒光素族染料標(biāo)記的核苷酸的效率增強(qiáng)的修飾的熱穩(wěn)定的DNA聚合酶。這種修飾的熱穩(wěn)定的DNA聚合酶是采用重組DNA技術(shù)制備的。所述聚合酶特別適用于鏈終止核酸測(cè)序方法。還提供了編碼本發(fā)明重組熱穩(wěn)定聚合酶的核酸以及含有所述核酸的載體和宿主細(xì)胞。也提供了含有本發(fā)明重組熱穩(wěn)定聚合酶的試劑盒。本發(fā)明的聚合酶和方法在對(duì)DNA測(cè)序具有成本顯著降低和效率提高的優(yōu)點(diǎn)。  
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