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公開(公告)號
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CN1207305C
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公開(公告)日
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2005.06.22
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申請(專利)號
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CN99125600.X
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申請日期
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1999.12.07
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專利名稱
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一種重組人白細(xì)胞介素-11的制備方法
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主分類號
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C07K14/54
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分類號
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C07K14/54;C12N15/24;C12N15/70;A61K38/20;A61P35/00
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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申請(專利權(quán))人
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北京雙鷺?biāo)帢I(yè)有限責(zé)任公司
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發(fā)明(設(shè)計)人
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徐明波;王勇波;黃向東;趙冰;;盧安京
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地址
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100041 北京市石景山區(qū)八大處高科技園區(qū)
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頒證日
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國際申請
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進(jìn)入國家日期
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專利代理機構(gòu)
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代理人
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國省代碼
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北京;11
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主權(quán)項
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一種重組人白細(xì)胞介素-11(IL-11)的制備方法，包括PCR引物設(shè)計、擴增的基因、表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建、表達(dá)產(chǎn)物的純化工藝，其特征在于：(1)5′端PCR引物及擴增cDNA5′端序列為：5′-CGGAATTCATGGGTCCACCACCTGGTCCACCT其中下劃線序列為EcoRI位點，(2)上述IL-11cDNA與含有PL、PR啟動子的原核表達(dá)載體pBV220組裝成高效表達(dá)質(zhì)粒pIL-11；(3)pIL-11轉(zhuǎn)化大腸桿菌，用溫度誘導(dǎo)IL-11基因的表達(dá)，產(chǎn)物以包涵體形式存在工程菌內(nèi)；(4)通過發(fā)酵技術(shù)擴增工程菌，用2YT作基礎(chǔ)培養(yǎng)基，在表達(dá)不同時機加氮源、碳源等營養(yǎng)素；(5)發(fā)酵后破碎菌體，純化包涵體并用尿素溶解變性，隨后采用凝膠排阻層析和陽離子交換層析二步法純化產(chǎn)品，兩步之間進(jìn)行分子復(fù)性。
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摘要
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本發(fā)明涉及一種重組人白細(xì)胞介素-11(IL-11)的制備方法。本發(fā)明利用遺傳密碼具有兼并性的原理，設(shè)計了大腸桿菌偏愛密碼子，PCR擴增的人IL-11cDNA片段與原核表達(dá)載體如pBV220組裝成高效表達(dá)質(zhì)粒pIL-11，轉(zhuǎn)化大腸桿菌后用溫度誘導(dǎo)IL-11基因表達(dá)，表達(dá)量達(dá)菌體總量蛋白的20％。工程菌經(jīng)發(fā)酵擴增，破碎后提取包涵體，包涵體經(jīng)純化后用尿素溶解變性并采用凝膠排阻層析和陽離子交換層析二步法純化產(chǎn)品，兩步之間進(jìn)行分子復(fù)性，加保護(hù)劑后制成藥用凍干制劑。該制劑可治療癌癥化療等原因引起的血小板減少癥，減少出血等并發(fā)癥。
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國際公布
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