| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1556223A |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2004.12.22 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200410012634.5 |
| 申請(qǐng)日期 | 2004.01.08 |
| 專利名稱 | 一種基因芯片上寡核苷酸連接檢測(cè)基因突變的方法 |
| 主分類號(hào) | C12Q1/68 |
| 分類號(hào) | C12Q1/68 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 鄧教宇;張先恩;張治平;周亞鳳;劉 強(qiáng);陸紅兵 |
| 地址 | 430071湖北省武漢市武昌小洪山 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 武漢宇晨專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 王敏鋒 |
| 國(guó)省代碼 | 湖北;42 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種基因芯片上寡核苷酸連接檢測(cè)基因突變的方法，該方法包括以下步驟：A.根據(jù)目標(biāo)基因序列，設(shè)計(jì)PCR引物，從臨床樣品中擴(kuò)增目標(biāo)基因片段；B.根據(jù)目標(biāo)基因中的已知基因突變，設(shè)計(jì)突變特異性寡核苷酸探針與對(duì)應(yīng)的信號(hào)檢測(cè)探針，突變特異性探針的長(zhǎng)度為5個(gè)堿基；對(duì)突變特異性探針的兩端分別進(jìn)行二硫化物和磷酸化修飾，對(duì)信號(hào)檢測(cè)探針的一端進(jìn)行生物素修飾；C.在普通載玻片上制作點(diǎn)陣，對(duì)載玻片進(jìn)行巰基硅烷化修飾；固定突變特異性寡核苷酸探針；D.選用T4DNA連接酶，以臨床樣品的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物為模板，以信號(hào)檢測(cè)探針為液相探針，進(jìn)行芯片連接酶反應(yīng)；E.采用堿性磷酸酶-親和素復(fù)合物，進(jìn)行原位酶標(biāo)信號(hào)檢測(cè)，封阻液25℃-37℃封阻10-20分鐘，甩干，親和素標(biāo)記堿性磷酸酶25℃-37℃作用10-20分鐘，漂洗液漂洗兩次，10-20分鐘/次，甩干，加底物NBT/BCIP，25℃-37℃顯色30-60分鐘。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開(kāi)了一種基因芯片上的基因突變檢測(cè)方法。其步驟是設(shè)計(jì)基因突變特異性寡核苷酸探針，制作基因芯片；進(jìn)行芯片連接酶反應(yīng)，在反應(yīng)過(guò)程中引入生物素；連接反應(yīng)完成后采用堿性磷酸酶復(fù)合物進(jìn)行在片信號(hào)檢測(cè)。本發(fā)明可對(duì)同一基因多個(gè)突變位點(diǎn)進(jìn)行同步檢測(cè)，對(duì)多個(gè)不同基因的突變情況進(jìn)行檢查，檢測(cè)速度快，準(zhǔn)確度和靈敏度高，操作簡(jiǎn)便，成本低，可用于細(xì)菌耐藥性、遺傳病等的臨床檢測(cè)。 |
| 國(guó)際公布 |
