| 公開(公告)號 | CN1163600C |
| 公開(公告)日 | 2004.08.25 |
| 申請(專利)號 | CN98812757.1 |
| 申請日期 | 1998.12.24 |
| 專利名稱 | 人胰島素原的制備方法 |
| 主分類號 | C12N15/17 |
| 分類號 | C12N15/17;C12N1/06;C12N15/62 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | 1997.12.29 KR 77163/1997 |
| 申請(專利權(quán))人 | 株式會社鐘根堂 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 洪清一;金正優(yōu);李旺植;金昌圭;金容麟 |
| 地址 | 韓國漢城市 |
| 頒證日 | 2004.08.25 |
| 國際申請 | PCT/KR1998/000464 1998.12.24 |
| 進(jìn)入國家日期 | 2000.06.29 |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 中原信達(dá)知識產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 丁業(yè)平;王維玉 |
| 國省代碼 | 韓國;KR |
| 主權(quán)項 | 一種制備人胰島素原的方法，包括以下步驟：(i)將表達(dá)內(nèi)含體形式的胰島素原融合蛋白質(zhì)的大腸桿菌細(xì)胞懸浮于緩沖液中，溶解所述細(xì)胞以得到內(nèi)含體；(ii)將步驟(i)中得到的所述內(nèi)含體懸浮于含有變性劑的緩沖液中，同時用亞硫酸鈉和連四硫酸鈉磺化所述的胰島素原融合蛋白質(zhì)，得到如下列通式(II)所代表的胰島素原S-磺酸鹽融合蛋白質(zhì)；(iii)將步驟(ii)得到的胰島素原S-磺酸鹽融合蛋白質(zhì)離心，得到沉淀，將沉淀溶解于甲酸，然后通過用溴化氰處理從所述融合蛋白質(zhì)切下胰島素原S-磺酸鹽，然后在減壓下干燥；(iv)使步驟(iii)得到干燥的胰島素原S-磺酸鹽溶解于緩沖液，在陰離子交換色譜上純化所述胰島素原S-磺酸鹽；(v)將步驟(iv)得到的所述純化的胰島素原S-磺酸鹽稀釋于第一緩沖液，通入氮氣以排除氧氣而得到第一混合物，將第一混合物與含有2-巰基乙醇的第二緩沖液在混合池中混合，并在儲庫中攪拌，得到含有如下列通式(I)所代表的胰島素原的重折疊反應(yīng)混合物；和(vi)將步驟(v)得到的重折疊反應(yīng)混合物應(yīng)用于吸附色譜樹脂，用水溶液洗脫，得到重折疊的人胰島素原，其中，R是可以被酶或化學(xué)降解的氨基酸殘基或肽；和X是胰島素A鏈A-1氨基和胰島素B鏈B-30羧基之間的鍵，其可以被酶或化學(xué)法從A鏈或B鏈中分離，其中A-1到A-21的區(qū)域是胰島素的A鏈，從B-1到B-30的區(qū)域是胰島素的B鏈。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及化學(xué)式(I)代表的人胰島素原的制備方法，其中R是可以被酶解或化學(xué)降解的氨基酸殘基或肽；倘若從A-1到A-21的區(qū)域是胰島素A鏈，從B-1到B-30的區(qū)域是胰島素B鏈，X就是胰島素A鏈A-1氨基和胰島素B鏈B-30羧基之間的鍵，其可以被酶或化學(xué)法從A鏈或B鏈中分開。按照本發(fā)明，人重組胰島素前體可以具備良好重現(xiàn)性地方便生產(chǎn)，因為溶解、磺化、濃縮、脫鹽和純化被大大簡化，同時重折疊反應(yīng)的產(chǎn)率增高�！� |
| 國際公布 | WO1999/033988 英 1999.7.8 |
