| 公開(公告)號 | CN101130075A |
| 公開(公告)日 | 2008.02.27 |
| 申請(專利)號 | CN200710018543.6 |
| 申請日期 | 2007.07.23 |
| 專利名稱 | 口蹄疫O、A、Asia-1型三價滅活疫苗 |
| 主分類號 | A61K39/295(2006.01)I |
| 分類號 | A61K39/295(2006.01)I;A61K39/135(2006.01)I;A61P31/14(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所 |
| 發(fā)明(設計)人 | 王永錄;張永光;方玉珍;蔣守田;劉力寬;潘 麗;呂建亮 |
| 地址 | 730046甘肅省蘭州市城關(guān)區(qū)徐家坪1號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 甘肅省專利服務中心 |
| 代理人 | 鮮 林 |
| 國省代碼 | 甘肅;62 |
| 主權(quán)項 | 一種口蹄疫O、A、Asia-1型三價滅活疫苗，由O型口蹄疫病毒抗原、A型口蹄疫病毒抗原、Asia-1型口蹄疫病毒抗原和佐劑按下述配比制成： 疫苗配制的比例為，抗原∶佐劑＝1∶1； 其中抗原按下述重量百分含量配制： 45％的已滅活并經(jīng)3倍濃縮的O型病毒抗原O/china/99、20％的A型病毒抗原AF/72和35％的Asia-1型病毒抗原Asia-1/XJ/KLAMY/04混合而成； 佐劑：采用蒙太得206佐劑——Montanide ISA 206佐劑； 上述原料按照下述工藝方法和順序制備而成： a、毒種 a.1、O型毒種：牛源O型口蹄疫病毒O/china/99株細胞毒； a.2、A型毒種：牛源A型口蹄疫病毒AF/72株細胞毒； a.3、Asia-1型毒種：牛源Asia-1型口蹄疫病毒Asia-1/XJ/KLAMY/04株細胞毒； b、制苗材料的制備 制苗材料為BHK-21單層細胞，細胞的培養(yǎng)按一般組織培養(yǎng)方法進行； c、病毒的增殖 用15L轉(zhuǎn)瓶BHK-21細胞通過濃縮培養(yǎng)法分別增殖制苗用O、A、Asia-1型病毒抗原，轉(zhuǎn)瓶機轉(zhuǎn)速為10～12r/h，收獲病毒液，在-15℃下凍結(jié)保存； d、病毒滅活的程序，包括： d.1過濾；將凍結(jié)的0、A、Asia-1型制苗病毒液分別融化，經(jīng)60～80目銅紗網(wǎng)過濾除細胞碎片，用7.5％NaHCO3調(diào)PH至7.6～7.8，并加200u/mL的青霉素、200μg/mL的鏈霉素； d.2滅活；向已過濾的O、A、Asia-1型病毒液中分別加入BEI二乙烯亞胺使其濃度達到2mmol/L，在37℃溫室或發(fā)酵罐夾套水浴循環(huán)升溫至30℃，并在30℃下持續(xù)滅活26h，其間每4h搖振1次，滅活終止期加入過濾除菌的50％硫代硫酸鈉溶液，使其終含量為2％，置2～8℃冷庫或發(fā)酵罐冰鹽水保溫待檢； d.3安檢；對O、A、Asia-1型滅活病毒液分別進行安檢，用每型滅活病毒液，頸背部皮下注射2～3日齡乳鼠，0.2mL/只，設對照乳鼠，觀察7d，全部乳鼠不出現(xiàn)口蹄疫癥狀和發(fā)病死亡，方為滅活徹底； d.4菌檢； 對O、A、Asia-1型滅活病毒液分別按《中國獸藥典》進行無菌檢驗； e.濃縮將O型、A型、Asia-1型制苗病毒液分別物理濃縮3倍； f、疫苗配制 疫苗乳化，先將油佐劑相真空負壓進料到乳化機內(nèi)，攪拌過程中，將滅活的病毒液按比例真空負壓進料到油佐劑相中，循環(huán)攪拌至抗原與佐劑充分混合后，通過均質(zhì)機乳化成略帶粘滯性的雙相油乳劑疫苗； g、疫苗檢驗，包括： g.1、物理性狀檢查；該疫苗為礦物油乳劑型，外觀呈白色或淡粉紅色略帶粘滯性流體。取一清潔吸管，吸取少許疫苗滴于清潔冷水表面，呈云霧狀擴散；吸取疫苗10mL，加入離心管中，以3000r/min離心15分鐘，水相析出應不超過0.5mL；用1mL吸管(出口內(nèi)徑1.2mm)吸取25±1℃的疫苗1mL，令其垂直自然流出0.4mL，所需時間應小于或等于8s； g.2、無菌檢驗； g.3、安全檢驗 g.3.1用體重350～450g的豚鼠2只，每只皮下注射疫苗2mL；用體重18～22g的小鼠5只，每只皮下注射疫苗0.5mL，連續(xù)觀察7日，均不應出現(xiàn)因注射疫苗引起的死亡或明顯的局部反應或全身反應； g.3.2用至少6月齡的健康易感牛3頭，每頭舌背面皮內(nèi)注射20個點，每點0.1mL疫苗，逐日觀察至少4d，之后，每頭牛肌肉注射疫苗9mL，繼續(xù)逐日觀察6d，均不出現(xiàn)口蹄疫癥狀或明顯的因注射疫苗引起的毒性反應； g.4、效力檢驗：用至少6月齡的健康易感牛45頭，分為3組，每組15頭。將待檢疫苗分為1頭份、1/3頭份、1/9頭份3個劑量組，每一劑量組分別于頸部肌肉注射15頭牛，接種21d后，將各劑量組免疫牛隨機等分為O型、A型、Asia-1型三個攻毒組，連同對照牛各2頭，分別進行攻毒；O型攻毒組，每頭牛舌上表面兩側(cè)分兩點皮內(nèi)注射�？谔阋逴型病毒強毒，每點0.1mL，共0.2mL，含104ID50；A型攻毒組，每頭牛舌上表面兩側(cè)分兩點皮內(nèi)注射�？谔阋逜型病毒強毒，每點0.1mL，共0.2mL，含104ID50；Asia-1型攻毒組，每頭牛舌上表面兩側(cè)分兩點皮內(nèi)注射�？谔阋逜sia-1型病毒強毒，每點0.1mL，共0.2mL，含104ID50；連續(xù)觀察10d；對照牛至少3蹄出現(xiàn)水泡或潰瘍，免疫牛僅在舌面出現(xiàn)水泡或潰瘍，而其它部位無病變時判為保護，除舌面以外任一部位出現(xiàn)典型口蹄疫水泡或潰瘍時判為不保護；根據(jù)免疫牛的保護數(shù)，按Karber法計算被檢疫苗的PD50，每頭份疫苗對0型、A型、Asia-1型口蹄疫的免疫效力應至少分別達到3PD50。 |
| 摘要 | 一種口蹄疫O、A、Asia-1型三價滅活疫苗，由O型口蹄疫病毒抗原、A型口蹄疫病毒抗原、Asia-1型口蹄疫病毒抗原和佐劑按抗原∶佐劑＝1∶1比例，其中抗原配比：45％的已滅活并經(jīng)3倍濃縮的O型病毒抗原O/china/99、20％的A型病毒抗原AF/72和35％的Asia-1型病毒抗原Asia-1/XJ/KLAMY/04混合而成；經(jīng)：毒種、制苗材料的制備、病毒的增殖、病毒滅活的程序、菌檢、濃縮、疫苗配制和疫苗檢驗步驟制備而成。本發(fā)明一次接種可同時預防O、A、Asia-1型三個血清型的口蹄疫，具有現(xiàn)用疫苗無法達到的便捷性和實用性，可降低用于防疫的人力、物力和財力，具有廣闊的應用前景。 |
| 國際公布 |
