豬瘟病毒及其致病機制
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豬瘟病毒及其致病機制研究進(jìn)展（二)3.2 CSFV對體外培養(yǎng)細(xì)胞的影響 CSFV在豬體內(nèi)感染并破壞多種細(xì)胞，使豬迅速發(fā)病、死亡 3- ；而在體外培養(yǎng)細(xì)胞中，CSFV一般不使培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生病理變化(Cytopathic effect，CPE)。但細(xì)胞可帶毒傳代，并在細(xì)胞分裂時將 病毒 傳至子代細(xì)胞中。CSFV在體外培養(yǎng)細(xì)胞中滴度低，是目前疫苗生產(chǎn)中一個比較難以解決的問題。 CSFV在豬的不同組織的細(xì)胞中增殖力不同，對淋巴系統(tǒng)細(xì)胞有嗜性。用豬淋巴細(xì)胞38A1D培養(yǎng)CSFV比用PK-15細(xì)胞系培養(yǎng)滴度高 6]。根據(jù)是否使培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生CPE，可將BVDV分為使培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生CPE的CP型BVDV和不使細(xì)胞產(chǎn)生CPE的nCP型BVDV。Hewicher-Trautwein等用BVDV感染綿
羊胎腦細(xì)胞培養(yǎng)物，發(fā)現(xiàn)CP型BVDV與nCP型BVDV的細(xì)胞嗜性相同，主要在腦培養(yǎng)物中的神經(jīng)元、星形細(xì)胞及含纖黏連蛋白的細(xì)胞中增殖。CP型BVDV還可使部分細(xì)胞死亡，造成培養(yǎng)物中細(xì)胞類型減少。感染CSFV的豬后期表現(xiàn)出神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，推測CSFV與BVDV一樣具有嗜神經(jīng)性 7]。CSFV在神經(jīng)細(xì)胞中增殖，損傷了神經(jīng)細(xì)胞，從而影響了神經(jīng)系統(tǒng)的功能，使瘟豬表現(xiàn)出運動失調(diào)等癥狀。尸體剖檢證實了CSFV在
豬腦神經(jīng)元及膠質(zhì)細(xì)胞中存在 8]。 瘟 病毒 屬病毒對不同宿主的神經(jīng)系統(tǒng)及免疫系統(tǒng)的細(xì)胞有嗜性，這種細(xì)胞嗜性有可能是導(dǎo)致宿主迅速發(fā)病、死亡的重要原因之一。研究CSFV等瘟病毒屬病毒對體外培養(yǎng)的不同種類細(xì)胞的嗜性及對宿主細(xì)胞的影響，對了解CSFV致病機制及其防控至關(guān)重要。 值得一提的是，為了研究CSFV的分子生物學(xué)和免疫學(xué)特征，提高其病毒滴度是非常關(guān)鍵的。用Roux培養(yǎng)瓶或轉(zhuǎn)瓶在
豬腎細(xì)胞PK-15上培養(yǎng)CSFV是應(yīng)用最為廣泛的方法，其滴度一般在106～107TCID50/mL。而應(yīng)用微載體細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，至少可將CSFV的滴度提高10倍。這種微載體(Cytodex3R，Pharmacia)是一種多孔微珠，將其加于懸浮細(xì)胞培養(yǎng)物中，在37 ℃、體積分?jǐn)?shù)為5% CO2培養(yǎng)箱中搖動培養(yǎng)時，細(xì)胞即可貼附在微載體上生長。由于減少了培養(yǎng)基用量，同時擴大了細(xì)胞的培養(yǎng)量，從而使CSFV的滴度比一般貼壁培養(yǎng)的毒價提高了1.5個滴度，且這種微載體經(jīng)處理后仍可繼續(xù)使用，因此，微載體細(xì)胞培養(yǎng)也是提高CSFV滴度的一個比較好的方法 8] 3.3 CSFV在體內(nèi)的復(fù)制過程 CSFV感染宿主細(xì)胞后，在宿主細(xì)胞中復(fù)制完成感染過程。CSFV吸附在細(xì)胞表面，并通過其囊膜糖蛋白Erns和E2細(xì)胞膜的融合或經(jīng)受體介導(dǎo)的胞飲作用進(jìn)入感染細(xì)胞 9] 。在體外培養(yǎng)CSFV感染的豬腎細(xì)胞時，在細(xì)胞上傳代引起Erns蛋白C端Ser476突變?yōu)锳rg殘基，這一改變使得不依賴硫酸乙酰
肝素(HS)的病毒變?yōu)槔肏S作為Erns受體的病毒，CSFV通過其Erns和細(xì)胞表面的HS的相互作用而完成最初的結(jié)合 9]。病毒進(jìn)入細(xì)胞及隨后其RNA從核衣殼中釋放的機制尚不清楚。由于CSFV基因組RNA只有一個開放閱讀框，因此其表達(dá)產(chǎn)物是一個3 898
氨基酸殘基的多聚蛋白(polyprotein)，而后再經(jīng)病毒自身的或細(xì)胞的蛋白酶作用，將其裂解成數(shù)個結(jié)構(gòu)蛋白與非結(jié)構(gòu)蛋白(圖2)。 CSFV開放閱讀框編碼的第一個蛋白是分子質(zhì)量為23 ku的多肽p23，以前曾認(rèn)為它就是病毒核衣殼蛋白，但實際上核衣殼蛋白是一個位于p23和第一個病毒蛋白E0之間的14 ku蛋白P14。p23本身具有蛋白水解酶活性，可使P14與p23之間迅速斷裂，離開多聚蛋白 9-10]。 E2下游區(qū)翻譯產(chǎn)物的研究比較少，主要是非結(jié)構(gòu)蛋白的表達(dá)。在1 030位～1 310位氨基酸殘基之間有一70個氨基酸組成的疏水區(qū)域，Collett認(rèn)為此疏水多肽可能與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜的結(jié)合有關(guān) 1 。對瘟病毒屬中牛病毒性
腹瀉病毒(Bovine viral diarrhoea virus，BVDV)和邊界病毒(Border disease virus，BDV)的研究發(fā)現(xiàn)，非結(jié)構(gòu)蛋白p125在表達(dá)后即被加工成p54和p80。p80在瘟病毒間呈極高同源性，p80屬于以Eif-4a為代表的類解螺旋酶(helicase like)超家族，并形成絲氨酸蛋白結(jié)構(gòu)域的一部分，因而p80是一個雙功能蛋白，但尚未發(fā)現(xiàn)CSFV p125被加工成p80。在ORF3′端的表達(dá)產(chǎn)物中存在一段Gly-Asp-Asp序列，可能代表著病毒RNA依賴的RNA聚合酶的一部分 1 。 衣殼蛋白在合成后幾分鐘內(nèi)即與基因組RNA相結(jié)合，包裝進(jìn)入核衣殼。E2-E2、E2-E0及E2-E1之間由二硫鍵(或個別較強的非共價鍵)連接成同型或異型二聚物，形成病毒的囊膜抗原。因此，二聚化可能在病毒裝配中非常重要 9]。E2、E1的C端有疏水性氨基酸殘基組成的結(jié)構(gòu)，可作為跨膜結(jié)構(gòu)域，使之鑲嵌于CSFV囊膜脂雙層中，E0無此疏水結(jié)構(gòu)，它與病毒粒子的聯(lián)系尚不清楚，可能與E2形成異源二聚體，但這種聯(lián)系不如E1和E2那樣牢固 1 。外膜蛋白糖基化后，通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體搬運到胞漿膜，成為一種跨膜蛋白。應(yīng)用電鏡超薄切片技術(shù)對感染細(xì)胞中病毒的形態(tài)發(fā)生進(jìn)行觀察的結(jié)果顯示，CSFV在胞內(nèi)增殖的主要部位是有豐富膜系統(tǒng)的細(xì)胞核周圍。成熟的病毒粒子多見于細(xì)胞質(zhì)中充滿無定型基質(zhì)的膜囊中，有時可觀察到膜囊在質(zhì)膜處的開口以及周圍的無定型基質(zhì)和其中的成熟病毒，提示CSFV可能通過這一特殊的結(jié)構(gòu)向外釋放，且多數(shù)釋放的病毒依然吸附在無定型基質(zhì)中。Gray等(1987)研究發(fā)現(xiàn)，在BVDV感染的細(xì)胞表面無病毒蛋白，這一現(xiàn)象推測BVDV是在宿主細(xì)胞內(nèi)的一種光滑小膜泡中裝配后，聚集在一起，再經(jīng)胞吐作用，將成熟病毒釋放出來。CSFV是否也以類似方式裝配和釋放還不清楚，但基于瘟病毒種間的相似性，可以設(shè)想CSFV也是由細(xì)胞表面以芽生方式釋放。 CSFV與宿主細(xì)胞相互作用機制的研究對該病的預(yù)防和控制具有重要的意義。隨著生物技術(shù)的進(jìn)一步提高，許多尚不清楚的方面如病毒致病機制、宿主抗病毒機理等都將逐步得到揭示，并在此基礎(chǔ)上開發(fā)和研制高效、安全的新型疫苗，在該病的防控中發(fā)揮重要作用。
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做好防疫
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做好免疫
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