 |
狂犬病（rabies)是由狂犬病病毒（Rabies Virus，RV)引起的所有溫血?jiǎng)游锏囊环N急性致死性腦脊髓炎，以狂躁不安、行為反常、攻擊行為、進(jìn)行性麻痹和最終死亡為特征，特點(diǎn)是潛伏期長(zhǎng)，致死率幾乎100%.
本病為人畜共患病，世界各地均存在。近年來(lái)，有不少發(fā)達(dá)國(guó)家由于采取免疫接種和綜合防治措施，已宣布消滅了此病。我國(guó)部分省市亦有本病的發(fā)生。
狂犬病病毒是一種單股負(fù)鏈RNA病毒。病毒粒子呈圓柱體，底部扁平，另一端鈍圓。有些病毒粒子，在其底部有一尾狀結(jié)構(gòu)，系病毒由胞漿膜芽生脫出的最后部分。整個(gè)病毒粒子的外形呈炮彈或槍彈狀。長(zhǎng)130~200nm，直徑75nm。表面有1072~1900個(gè)突起，排列整齊，于負(fù)染標(biāo)本中表現(xiàn)為六邊形蜂房狀結(jié)構(gòu)。每個(gè)突起長(zhǎng)約8~10nm，由糖蛋白組成。病毒內(nèi)部為螺旋形的核衣殼，核衣殼由單股RNA及5種蛋白質(zhì)（M、L、N、P、G)組成，其中糖蛋白是RV的主要保護(hù)性抗原。
狂犬病病毒不穩(wěn)定，但能抵抗自溶及腐爛，在自溶的腦組織中可以保持活力7~10d。凍干條件下長(zhǎng)期存活。在50%甘油中保存的感染腦組織中至少可以存活1個(gè)月，4℃下數(shù)周，低溫中數(shù)月，甚至幾年，室溫中不穩(wěn)定。反復(fù)凍融可使病毒滅活，紫外線照射、蛋白酶、酸、膽鹽、乙醚、升汞和季胺類(lèi)化合物（如新潔爾滅)以及自然光、熱等都可迅速破壞病毒活力。56℃，15~30min內(nèi)、1%甲醛溶液和3%來(lái)蘇兒15min內(nèi)可使病毒滅活，60%以上酒精也能很快殺死病毒。真空條件下凍干保存的病毒可于4℃下存活數(shù)年。
細(xì)胞內(nèi)培養(yǎng)的狂犬病病毒可以凝集鵝和1日齡雛雞的紅細(xì)胞，動(dòng)物腦內(nèi)的病毒不呈現(xiàn)血凝現(xiàn)象�？袢〔《灸Z紅細(xì)胞的能力可被特異性抗體所抑制，故可進(jìn)行血凝抑制試驗(yàn)。
RV只有一種抗原型，但近年來(lái)證明狂犬病病毒的表面糖蛋白抗原性是不同的。有人根據(jù)血清中和試驗(yàn)，即與單克隆抗體的反應(yīng)特性不同，將狂犬病病毒分為4個(gè)血清型：1型為古典型狂犬病病毒株，2型為L(zhǎng)agos蝙蝠病毒，3型為Makola病毒，4型為Duvenhage病毒。通過(guò)PCR技術(shù)對(duì)不同病毒株的N基因進(jìn)行擴(kuò)增，根據(jù)測(cè)序結(jié)果，還可將不同來(lái)源的病毒株分為6個(gè)基因型，前4個(gè)基因型分別與4個(gè)血清型相對(duì)應(yīng)，歐洲蝙蝠狂犬病病毒株被分為5型和6型。分離自蚊的病毒株仍屬于未分類(lèi)的狂犬病病毒。但是這種抗原或基因型的差異似乎并不影響對(duì)動(dòng)物的免疫保護(hù)力。
RV可在雞胚內(nèi)、原代雞胚成纖維細(xì)胞以及小鼠和倉(cāng)鼠腎上皮細(xì)胞培養(yǎng)物中增殖，并在適當(dāng)條件下形成蝕斑。此外，RV也可在兔內(nèi)皮細(xì)胞系、蝰蛇細(xì)胞系、人二倍體細(xì)胞（如WI-38、MRC-5和HDCS)等細(xì)胞株中良好增殖，并能形成光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)的嗜酸性包涵體。
將狂犬病病毒接種于乳鼠（小鼠或倉(cāng)鼠)腦內(nèi)，可以獲得高滴度的病毒，因此，乳鼠常被用于進(jìn)行毒株的傳代。
所有溫血?jiǎng)游飳?duì)RV均易感，其中臭鼬、野生犬科動(dòng)物、浣熊、蝙蝠及牛最易感，其次為犬、貓、馬、綿羊、山羊及人等。自然界中野生動(dòng)物是傳播狂犬病病毒的貯存宿主。但家畜則是感染人的主要傳播源。犬、貓等動(dòng)物對(duì)RV高度敏感，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行有效的預(yù)防接種。
RV主要存在于腦組織，睡液腺和睡液中也有大量病毒，并隨睡液排出體外。本病的傳播主要通過(guò)動(dòng)物咬傷的皮膚、黏膜感染；亦有通過(guò)氣霧經(jīng)呼吸道及誤食患病動(dòng)物的肉、動(dòng)物間相互殘食經(jīng)消化道感染的報(bào)道。
犬感染狂犬病病毒后，潛伏期一般為2~8周，長(zhǎng)的可達(dá)數(shù)月至數(shù)年，短的僅有1周。這主要與被咬部位、暴露類(lèi)型、病毒在暴露部位的數(shù)量和機(jī)體的免疫狀態(tài)等有關(guān)。犬患病時(shí)，往往改變習(xí)性，病初常有逃跑或躲避趨勢(shì)，故也將狂犬病稱(chēng)為"逃跑病"。病犬可能失蹤數(shù)天后歸來(lái)，此時(shí)體重減輕，滿身污泥，皮毛上可能帶有血跡。主人對(duì)其愛(ài)撫或?yàn)槠湎礈煅E時(shí)，往往被咬。狂躁發(fā)作時(shí)，瘋?cè)教幈甲�，遠(yuǎn)達(dá)40~60km，沿途隨時(shí)都可能撲咬人及所遇到的各種家畜。病犬行為兇猛，間或神志清楚，重新認(rèn)識(shí)主人。拒食或出現(xiàn)貪婪性狂食現(xiàn)象，如吞食木片、石子、煤塊或金屬，可能發(fā)生自咬，也常發(fā)生嘔吐。經(jīng)過(guò)2~4d的狂暴期，進(jìn)入麻痹期，下頜下垂，舌脫出口外，嚴(yán)重流涎，后軀麻痹，行走搖擺，臥地不起。病犬最后呼吸麻痹或衰竭而死。
貓的癥狀與犬相似，但病程較短，出現(xiàn)癥狀2~4d就死亡。病貓喜隱于暗處，并發(fā)出粗厲叫聲，繼而狂暴，兇猛地攻擊人畜。
狂犬病的一個(gè)示證性病變，是在感染神經(jīng)元內(nèi)出現(xiàn)胞漿內(nèi)嗜酸性包涵體，在海馬回的錐體細(xì)胞以及小腦的Purkinje細(xì)胞內(nèi)最易發(fā)現(xiàn)這種包涵體，即Negri小體。
典型病例可根據(jù)臨床癥狀、咬傷病史做出初步診斷。確診須經(jīng)實(shí)驗(yàn)室診斷。
腦觸片法為一種迅速、經(jīng)濟(jì)的方法，即取瀕死期動(dòng)物或死于狂犬病患者的延腦、海馬回做觸片，用含堿性復(fù)紅加美藍(lán)Seller氏染液染色、鏡檢，檢查特異包涵體，即Negri小體。Negri小體位于神經(jīng)細(xì)胞漿內(nèi)，直徑3~20fzm不等，呈梭形、圓形或橢圓形，呈嗜酸性著染（鮮紅色)，但在其中�？梢�(jiàn)到嗜堿性（藍(lán)色)小顆粒。神經(jīng)細(xì)胞染成藍(lán)色，間質(zhì)呈粉紅色，紅細(xì)胞呈橘紅色。應(yīng)注意與偶爾存在的犬瘟熱病毒引起的包涵體區(qū)別。檢出Negh小體，即可診斷為狂犬病。但是必須指出，并非所有發(fā)病動(dòng)物腦內(nèi)都能找到包涵體，犬腦包涵體的陽(yáng)性檢出率為70%~90%。
是一種迅速而特異性很強(qiáng)的診斷方法。取可疑病犬腦組織或唾液腺制成冰凍切片或觸片，用熒光抗體染色，在熒光顯微鏡下檢查，胞漿內(nèi)如有翠綠色顆�；虬邏K熒光即可確診。高免血清是用固定毒多次接種家兔、豚鼠或綿羊而制備的。按常規(guī)法提取IgG，并標(biāo)記熒光素，測(cè)定最適稀釋度后應(yīng)用。近年來(lái)常用抗狂RV單克隆抗體進(jìn)行標(biāo)記。
先用抗狂犬病毒陽(yáng)性血清或IgG包被40孔板，加待測(cè)腦懸液，再用標(biāo)記HRP的陽(yáng)性IgG進(jìn)行反應(yīng)；亦可采用特異性抗體作為一抗與被檢樣品反應(yīng)，然后再與酶標(biāo)二抗進(jìn)行反應(yīng)。同時(shí)，設(shè)陽(yáng)性及陰性抗原對(duì)照，如被測(cè)樣品出現(xiàn)特異性顯色，即可診斷為狂犬病。
取腦或睡液腺等材料用緩沖鹽水或含10%滅活豚鼠血清的生理鹽水研磨成10%乳劑，腦內(nèi)接種5~7曰齡乳鼠，3~4d后如發(fā)現(xiàn)晡乳力減弱，痙攣，麻痹死亡，即可取其腦組織檢查包涵體，并制成抗原。新分離的病毒可用電子顯微鏡直接觀察，或者用抗狂犬病特異免疫血清進(jìn)行中和試驗(yàn)或血凝抑制試驗(yàn)加以鑒定。
PCR技術(shù)于1990年首次應(yīng)用于鼠腦內(nèi)狂犬病病毒的檢測(cè)，后來(lái)用于狂犬病的診斷研究�？袢〔《镜腜CR擴(kuò)增分為2步：①病毒RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA；②cDNA的PCR擴(kuò)增。根據(jù)被檢樣品PCR產(chǎn)物大小與設(shè)計(jì)引物間序列大小是否一致，即可確診。如有條件，也可采用測(cè)序的方法，讀出被檢樣品PCwww.med126.comR擴(kuò)增產(chǎn)物的部分序列，可更準(zhǔn)確地做出診斷。PCR技術(shù)具有快速、特異、操作簡(jiǎn)單等特點(diǎn)，在狂犬病診斷中具有很好的應(yīng)用前景。
臨床癥狀明顯的犬，無(wú)法治愈，應(yīng)予捕殺。對(duì)疑有狂犬病的犬應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格隔離，以防止與其他動(dòng)物或人接觸，必要時(shí)對(duì)其施行安樂(lè)死術(shù)，并取腦組織進(jìn)行狂犬病病毒檢查。
由于發(fā)病動(dòng)物幾乎無(wú)例外地死亡，因此狂犬病不存在病后免疫問(wèn)題。
犬等動(dòng)物對(duì)該病的預(yù)防，主要是預(yù)防接種。目前所用的常規(guī)疫苗，分活疫苗和滅活疫苗兩類(lèi)。滅活苗安全，效果確實(shí)，發(fā)達(dá)國(guó)家目前一直使用這類(lèi)滅活苗。我國(guó)人狂犬病的緊急預(yù)防也采用滅活的濃縮疫苗，其制備成本比較昂貴，因此，未在犬中推廣應(yīng)用。用石炭酸滅活的綿羊或山羊腦疫苗，對(duì)犬和其他動(dòng)物都有較好的免疫保護(hù)力，免疫期長(zhǎng)達(dá)1年左右。如利用某些滅活疫苗在3月齡時(shí)給犬和貓免疫，1年后再加強(qiáng)注射1次，就可以獲得3年期的保護(hù)力。以后可每年或每3年加強(qiáng)1次免疫。
但目前在臨床實(shí)際應(yīng)用最為廣泛的仍然是弱毒活疫苗。我國(guó)使用的獸用疫苗，20世紀(jì)50年代到80年代先后采用了羊腦固定毒【兔肉價(jià)格行情】減毒苗、Semple型疫苗和FluryLEP疫苗，80年代初從國(guó)外引進(jìn)了ERA株，在BHK-21細(xì)胞上進(jìn)行生產(chǎn)，其對(duì)馬、牛、羊和犬狂犬病的免疫力可達(dá)1年以上。
中國(guó)藥品生物制品檢定所利用CTN-181毒株研制的BHK-21傳代細(xì)胞活疫苗，免疫原性和FluryLEP相似，安全性比FluryLEP更好。
長(zhǎng)春生物制品研究所制備的αG株原代倉(cāng)鼠腎弱毒佐劑疫苗給犬做免疫接種后，中和抗體至少可保持1年，加強(qiáng)免疫1次，免疫期可持續(xù)2年以上。
中國(guó)人民解放軍軍需大學(xué)、長(zhǎng)春生物制品研究所分別從SAD株和CTN-1株中篩選制備了犬用口服疫苗，犬口服后抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)率分別大于或等于97%和80%。
上述疫苗在控制傳染媒介（犬)、降低人群被咬傷率和狂犬病死亡率方面都起了積極作用。
由于弱毒活疫苗具有引起狂犬病的潛在危險(xiǎn)，從安全性角度考慮，越來(lái)越多的人傾向于使用滅活的獸用疫苗或狂犬病的基因工程疫苗。目前，世界上許多國(guó)家已正積極開(kāi)展這方面的研究。
狂犬病是一種人畜共患的烈性傳染病。從世界各國(guó)來(lái)看，犬是人類(lèi)狂犬病的主要傳播者，其次是貓。歐美國(guó)家全面頭施QDV措施，即檢疫（quarantine)、消滅流浪犬（destruction of stray dogs)和免疫接種（vaccatbn)，對(duì)犬、貓等伴侶動(dòng)物實(shí)行強(qiáng)制性接種和取締無(wú)主和流浪犬，已經(jīng)取得了明顯的效果，在數(shù)年前實(shí)際上已消滅了人的狂犬病。南美阿根廷、秘魯、巴西等國(guó)家的某些城市中，開(kāi)展了大規(guī)模犬的疫苗接種計(jì)劃，已基本上消滅了犬的狂犬病，同時(shí)也大大地降低了人狂犬病的發(fā)病率。
野生動(dòng)物是狂犬病的自然宿主，如何控制野生動(dòng)物狂犬病對(duì)人類(lèi)的威脅，目前惟一可行的防治措施就是控制某些傳染媒介動(dòng)物的群體數(shù)量，防止這些動(dòng)物與犬、貓和人接觸。
