引子2006年1月21日，來自北京中日友好醫(yī)院的最新消息，中國人用禽流感疫苗臨床研究進(jìn)展順利。截至目前，已有66名志愿者接種了試驗用疫苗，均未出現(xiàn)明顯不適反應(yīng)。
疫苗的研制者之一北京科興生物制品有限公司表示，目前人用禽流感疫苗生產(chǎn)線已準(zhǔn)備完畢。在疫苗完成全部臨床試驗后，或者在緊急情況下，經(jīng)國家有關(guān)部門批準(zhǔn)，該生產(chǎn)線可立即投入生產(chǎn)。如果發(fā)現(xiàn)禽流感病毒的變異，也可在48天內(nèi)完成對病毒的改造，并在4個月內(nèi)研制出新的疫苗。
專家認(rèn)為，這表明我國在人禽流感疫苗方面的科研水平已經(jīng)與全球一流水平同步。
關(guān)于這支疫苗的前世今生，故事則要從兩年前說起。
越南－香港－英國
2004年1月17日。香港Marken快遞公司——該公司以快遞高危醫(yī)藥和病毒物品而蜚聲業(yè)界。
靜靜的快遞大廳里，預(yù)備出貨的箱子一一排列，其中一箱的封紙上寫著，發(fā)件人地址：香港九龍南昌街三百八十二號。發(fā)件人：香港衛(wèi)生署林薇玲實驗室（Dr. Wilina WL.Lim)。
沒有幾個人知道這個箱子的特殊之處——一株致命H5N1病毒匿身其中。
病毒取自一位12歲的越南女孩，女孩已逝。
時值2004年前后，越南爆發(fā)高致病性禽流感，引發(fā)全球關(guān)注。
WHO（世界衛(wèi)生組織)共有四個流感合作中心（WHO Collaborating Centres for Influenza)，分別在美國、英國、澳大利亞和日本。當(dāng)有緊急疫情爆發(fā)時，這些實驗室會協(xié)助WHO的全球工作。按照WHO的工作流程，當(dāng)某地爆發(fā)流感疫情時，所在國的國家實驗室將前往取樣調(diào)查，并將取樣數(shù)據(jù)、某些時候也包括病毒樣本本身，提交給WHO四個流感合作中心之一。
WHO八大參考實驗室之一的林薇玲實驗室，地處香港，靠近越南，病毒就這樣從越南被取回香港。
林薇玲，1997年香港流感大流行時進(jìn)行H5N1取樣和分離的主要專家，在控制傳染病和非傳染病方面成績卓著，曾被《新聞周刊》評為“21世紀(jì)女強(qiáng)人”。
這株剛剛殺死12歲越南女孩的病毒現(xiàn)在有了新的使命——為人類研制人禽流感疫苗作貢獻(xiàn)。
為此，WHO的專家已經(jīng)召開過遠(yuǎn)程電話會議，討論是否需要對H5N1病毒的部分基因片斷進(jìn)行修改，以提供更加安全的病毒樣本給疫苗生產(chǎn)商實驗。當(dāng)時科學(xué)家們的意見不甚一致。
最終說服科學(xué)家們立即開始實驗的還是病毒自己。
“病毒已經(jīng)發(fā)生了變化，它與之前的H5N1的抗體反應(yīng)都不同�！盢IBSC的JohnWood博士依然清楚地記得當(dāng)初的情形。
在一次電話會議后，科學(xué)家們準(zhǔn)備開始行動：去掉H5N1基因鏈中高致病性的
氨基酸，降低H5N1的毒性，經(jīng)過重配后，再交與疫苗生產(chǎn)商實驗。
JohnWood博士告訴記者，當(dāng)時具備科研能力能將越南女孩病毒樣本中高致病性病毒去除的機(jī)構(gòu)只有兩個：英國的NIBSC和美國St. Jude Research Hospital，Dr. Robert Webster的實驗室。
美國實驗室已經(jīng)采用了另一個樣本進(jìn)行實驗，制造了VNH5N1-PR8/CDC-RG禽流感疫苗生產(chǎn)用毒株，這也就是之后巴斯德公司用于生產(chǎn)并被美國政府采購的疫苗生產(chǎn)用毒株。為避免實驗的相同性，NIBSC則要求從林薇玲實驗室提取越南女孩的病毒樣本進(jìn)行實驗。
我們的主角——一株令人聞名色變的H5N1病毒，現(xiàn)在該再次上路了。這可不是一般的快遞。
根據(jù)IATA（國際航空運輸協(xié)會，International Air Transport Association)的標(biāo)準(zhǔn)，快遞公司人員必須為病毒準(zhǔn)備好能擰緊的有蓋小瓶，將其置于有干冰保護(hù)的泡沫箱中，再在外面套上一層泡沫防護(hù)箱。最外面的這個體積為0.5×0.5×0.5立方米的紙箱與常規(guī)的空運物品沒有區(qū)別。只是物品的外包裝上具名：高危險品，有傳染性。
快遞的包裝上還寫著：目的地：Blanche Lane，South Mimms， Potters Bar，Hertfordshire EN6 3QG United Kingdom（英國)。
收件人：NIBSC（National Institute for Biological Standards and Control. 國立生物制品標(biāo)準(zhǔn)和檢定研究所)， John Wood博士。
英國：病毒80日變身記
“那一天我們都在等待著病毒的到來。”2004年1月19日，John Wood博士收到快遞。
病毒被直接送往NIBSC的P4實驗室。在這個有300名工作人員，其中200名科學(xué)家的工作中心，一共9名人員參加了此次實驗：其中3名科學(xué)家（Diane Major， Carolyn Nicholson，Jim Robertson)、4名技師和兩名高級科學(xué)家檢測實驗。其中一名高級科學(xué)家即是JohnWood博士。
“我們準(zhǔn)備好了實驗室，檢驗了每一臺設(shè)備是否運作正常。”Diane Major，這位在此實驗室流感小組工作28年的科學(xué)家在電話中回憶，正是她主要負(fù)責(zé)了病毒后期的安全測試。
這株可惡的病毒將在此經(jīng)受兩道處理流程：1.從高致病性禽流感病毒克隆出血凝素和神經(jīng)氨酸酶基因，并將其與其他基因重配產(chǎn)生新的毒種，該毒種必須不再具有高致病性并同時能在雞胚內(nèi)生存；2.檢驗新產(chǎn)生的毒種的安全性，必須對于人和環(huán)境都絕對安全。
來自越南女孩的這株H5N1與其他高致病性病毒一樣，屬于RNA型病毒。
科學(xué)家們先通過逆轉(zhuǎn)錄將RNA轉(zhuǎn)錄成DNA.獲得含有HA抗原和NA抗原的基因片段。其中的高致病性的基因即存在于HA抗原上。去掉其中4個氨基酸（3個
精氨酸，1個
賴氨酸)，并改變1個精氨酸為脯安酸之后，H5N1的高致病性便已去除。之后將含有HA抗原和NA抗原基因片段的質(zhì)粒與另外10個含有PR8基因片段的質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染VERO細(xì)胞，獲得了新的毒種。
現(xiàn)在，從香港過來的那株H5N1已經(jīng)被重配成了新的毒株，新毒株被命名為“NIBRG-14”。
接下來是檢驗“NIBRG-14”的過程。在確定新毒種是否安全之前，它不能離開NIBSC的P4實驗室。
Major博士和她的同事們，對新的毒種實施了三項實驗，實驗對象分別為：雞胚、小雞和雪貂。
第一個實驗將NIBRG-14病毒直接注射到雞胚中，三天后，發(fā)現(xiàn)雞胚仍然存活。這就說明，病毒能夠在雞胚中生長而且并不會殺死胚胎。這與之前在越南發(fā)現(xiàn)的H5N1原病毒在兩天內(nèi)就殺死胚胎的情形是完全不一樣的。
第二個實驗是將病毒原液注射到小雞的體內(nèi)。十天后觀察這些病毒是否有產(chǎn)生新的疾病或者是否讓小雞致死。十天后，小雞一切正常。
最后一個實驗是在雪貂身上。因為此種動物的流感發(fā)病機(jī)理與人類極其相似。如果這種病毒讓雪貂致命，那么毫無疑問對人同樣具有致命性。注射NIBRG－14之后，雪貂的任何器官都無發(fā)病現(xiàn)象。
新毒株看來經(jīng)受住了檢驗，是時候把它帶出P4實驗室，提供給疫苗生產(chǎn)商了。
John Wood博士介紹，接受病毒的公司并不必為此病毒付費，但必須簽署國際通用的“物質(zhì)轉(zhuǎn)讓協(xié)議”（MTA：Materials Transfer Agreement)。協(xié)議規(guī)定，疫苗生產(chǎn)商不得對實驗樣本進(jìn)行科學(xué)的改造，只能在流感大流行時期才能使用，且所有實驗室必須具備WHO所要求的實驗規(guī)格。但實驗一旦用于商業(yè)性生產(chǎn)，生產(chǎn)商須支付第三方費用，具體數(shù)額尚待討論。
于是，距離H5N1病毒進(jìn)入NIBSC實驗室80天后，病毒被重配為NIBRG-14，即將離開NIBSC的實驗室。
2004年4月8日之后，NIBRG-14們被發(fā)送往全球14個國家的50個實驗室，其中有6家中國實驗室。
中國70天：從“NIBRG-14”到疫苗
浙江天元生物藥業(yè)股份有限公司的陳先生記得他遇到John Wood博士是2005年2月，在WHO的會議上�！爱�(dāng)時他提到他們有這樣一種疫苗病毒種樣本，我們就向他申請索取�！边@位在公司負(fù)責(zé)科研開發(fā)與品質(zhì)管理的負(fù)責(zé)人告訴記者。
NIBRG-14到達(dá)杭州的時間是2005年的8月。它靜靜地躺在天元生物的實驗室里。
“HA和NA的基因序列告訴我們，它仍然是H5N1.”陳說，我們一拿到該毒種就馬上開始試驗工作。
根據(jù)病毒學(xué)原理，純化后的病毒注射到人體內(nèi)，因其高致病性氨基酸已經(jīng)去除，因此不具備致病性；但這種病毒到達(dá)人體內(nèi)后，人體會自動產(chǎn)生抗體�？v使抗體在人體內(nèi)滴度逐漸遞減，也會在人體再次遇到H5N1時，激活其記憶功能，產(chǎn)生抗體。
“我們要做的是一個病毒在雞胚細(xì)胞上適應(yīng)生長、制備病毒、病毒純化、試制疫苗并檢驗的過程�！标惤忉�。
生產(chǎn)疫苗用的載體是雞胚。將毒種直接用注射器接種到孵化9到10天左右的雞胚尿囊腔中，利用其中的尿囊液進(jìn)行生長。
48小時到72小時之后，收獲尿囊腔中的病毒液。收獲之后進(jìn)行“滅活”工作，用甲醛滅活毒種。
接下來“超濾濃縮”，即過濾去除大部分水和部分雜物，留下病毒。
然后是“超速離心”，將病毒顆粒再一次純化，只保留病毒顆粒。然后在病毒顆粒懸液中加入Triton X-100或者Triton N-101，去除病毒顆粒上的脂蛋白（脂蛋白在病毒疫苗中有副作用)。
去掉之后再次“超濾”，去掉Triton.隨后通過“凝膠層析”進(jìn)一步純化，保留病毒顆粒。
最后出來的溶液即可以配制成疫苗。臨床一般配制成為每人份15微克。裝在西林瓶或者預(yù)灌裝注射器中。經(jīng)過質(zhì)量檢定、貼上標(biāo)簽、包裝，即成為成型的疫苗。
經(jīng)過如此一系列復(fù)雜的流程，在70天左右，英國來客NIBRG-14在杭州變成了防止H5N1禽流感侵襲的疫苗。
天元公司生產(chǎn)出第一支疫苗的時間在2005年10月12日。
與此同時，在中國的另外一個公司也是在用同樣的毒本試制全病毒疫苗。2005年11月14日，北京科興公司“人用禽流感疫苗研制”獲得中國科技部驗收成功。
2006年1月21日，已有66名志愿者接種了試驗用疫苗，均未出現(xiàn)明顯不適反應(yīng)。
而現(xiàn)在科學(xué)家們的擔(dān)心是，如果流感大規(guī)模流行，疫苗是否有足夠的儲備量？
－－－－－－－－－－－請問一下各位同道,國內(nèi)有沒有類似于像上帖說到的那家香港Marken快遞公司那樣,專門運遞藥品或者藥水,醫(yī)療用品的郵遞公司?
望知道的同道能在此帖給予回復(fù)!謝謝!
