1試劑
1.1 PEG(MW4000或6000)。
1.20.5mol /L高氯酸(HClO4)溶液。
1.3 5%BaCl2溶液。
1.40.1mol /L碘溶液。
2 操作
2.1 取1ml樣品,在靈敏度允許的范圍內(nèi),先將樣品稀釋到蛋白質(zhì)濃度≤1%,加入5.0ml 0.5mol /L高氯酸溶液,15分鐘后,用4000r/min,離心10分鐘,取上清液(如蛋白濃度過(guò)高,上清混濁,則要過(guò)濾至清)。
2.2 PEG測(cè)定
于4ml上清液中加入1.0ml5%BaCl2和0.5ml的0.1mol/L碘溶液,反應(yīng)15分鐘后,進(jìn)行比色。記錄各樣品的A535值。
2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制
取m.bhskgw.cn/pharm/≤1%蛋白質(zhì)溶液,另入PEG合成10~80μg/ml 溶液。根據(jù)樣品的大致濃度,用去除蛋白質(zhì)后溶液制劑作標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2.4 根據(jù)樣品讀數(shù),從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出PEG含量。
3 計(jì)算
樣品中PCG濃度%(g/ml)=樣品稀釋倍數(shù)×查得標(biāo)準(zhǔn)曲線相應(yīng)的PEG濃度
附注
1.整個(gè)比色過(guò)程應(yīng)在試劑加入以后的15~45分鐘內(nèi)完www.med126.com成,否則將要影響結(jié)果。
2.本方法的靈敏度隨被測(cè)定PEG的分子量的增加而提高。