本品系由無癥狀HBsAg攜帶者血漿提取的HBsAg，經(jīng)純化、滅活及加佐劑吸附后制成。用于預(yù)防乙型肝炎。
1 血源
1.1 對獻(xiàn)血員的要求
1.1.1 獻(xiàn)血員應(yīng)為20～50歲無癥狀HBsAg攜帶者，其肝功能應(yīng)無顯著異常，并穩(wěn)定。對獻(xiàn)血員的其他要求按《原料血漿采集（單采血漿術(shù))規(guī)程》執(zhí)行。
1.1.2個月接種過活疫苗，1年內(nèi)接種過狂犬病疫苗者，均不采血。
1.1.3 必要時以免疫擴(kuò)散法（ID)測定HBsAg亞型。血源應(yīng)以ad亞型為主，可有少量ay亞型。
1.2 單份血漿檢查
1.2.1 無菌試驗(yàn)
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
1.2.2HbsAg測定
用對流電泳法測定，HBsAg滴度應(yīng)≥1∶8，或用反向血凝法（RPHA)測定，滴度應(yīng)≥1∶1024。
1.3 混合血漿檢查
1.3.1支原體檢查
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
1.3.2 取樣接種孔雀綠培養(yǎng)基，35～37℃培養(yǎng)28天，結(jié)果應(yīng)為陰性。
1.3m.bhskgw.cn/hushi/.3 外源病毒檢查
用Vero細(xì)胞和人二倍體細(xì)胞各3瓶，每瓶容量為10～15ml，各接種0.2ml樣品，35～37℃培養(yǎng)10天，應(yīng)無病變出現(xiàn)。用0.2%～0.5%雞與豚鼠紅細(xì)胞等量混合后于37℃吸附1小時，測定血吸附反應(yīng)，應(yīng)均為陰性。
2 抗原的濃縮和變化
2.1 血漿脫纖維
于血漿中加入氯化鈣溶液，使之脫纖維。
2.2硫酸銨沉淀
于血清中加入硫酸銨飽和溶液，或用固體硫酸銨，使最后達(dá)到適宜的飽和度，沉淀HBsA.
2.3 超離心純化
溴化鉀等密度區(qū)帶離心2～3次，每次離心后分部收樣，根據(jù)紫外監(jiān)測峰及密度測定，合并合格的樣品，經(jīng)超濾去鹽濃縮。蔗糖速率區(qū)帶離心1～2次，分離出HBsAg。
3 滅活
3.1 胃酶處理
將HBsAg懸液加入適量胃酶，置35～37℃處理4～5小時，最后超濾去胃酶。
3.2 尿素處理
于HBsAg懸液中加尿素至4～8mol/L置37℃處理4～5小時，超濾去尿素。亦可不用尿素處理。
3.3福爾馬林滅活
于HBsAg懸液中按1∶4000加入福爾馬林，置37℃72～96小時。不用尿素處理者可用1∶2000福爾馬林滅活。
4 稀釋與吸附
已滅活的疫苗原液經(jīng)除菌過濾后，根據(jù)Lowry法檢測折算的特異性蛋白含量進(jìn)行稀釋，加入A1（OH)3吸附，并于疫苗內(nèi)加入防腐劑。
5 半成品檢定
5.1 總蛋白含量測定
用Lowry法測定，使用檢定所提供的標(biāo)準(zhǔn)品。
5.2HBsAg含量測定
按總蛋白含量將樣品稀釋至不同稀釋度，用RIA或火箭電泳法測定，使用檢定所提供的標(biāo)準(zhǔn)品，HBsAg含量應(yīng)在90%以上。
5.3 電鏡檢查
取每臺離心機(jī)每次蔗糖離心后的樣品，制作5個銅網(wǎng)，在60000倍電鏡下，每個銅網(wǎng)觀察6個視野，結(jié)果應(yīng)主要為22nm球形顆粒，未見Dane顆粒為合格。有可疑Dane顆粒者應(yīng)以加倍視野數(shù)檢查。
5.4 殘留雜蛋白檢查
5.4.1 聚丙烯酰胺凝膠電泳法
濃縮膠濃度為4%，分離膠為7.5%，加10μgHBsAg樣品和適量的人血清白蛋白進(jìn)行電泳，銀染，試驗(yàn)樣品應(yīng)不出現(xiàn)明顯雜蛋白帶。
5.4.2SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳法
HBsAg樣品經(jīng)SDS處理后在7.0%濃縮膠和15%分離膠中加入5μg進(jìn)行電泳，結(jié)果在分離膠中應(yīng)主要存m.bhskgw.cn/zhicheng/在22000及28000分子量帶，應(yīng)不出現(xiàn)明顯的雜蛋白帶。
5.5HBV DNA檢查
用HBv DNA片段制備探針，取200μg除菌后的樣品與探針進(jìn)行雜交，結(jié)果應(yīng)為陰性�？蒯樀撵`敏度應(yīng)≤1pg。
5.6 無菌試驗(yàn)
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
6 分裝
每支安瓿分裝1.0ml，HBsAg含量分別為10μg和30μg兩種規(guī)程。
7 成品檢定
7.1 無菌試驗(yàn)
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
7.2 安全試驗(yàn)
每亞批疫苗皮下注射體重14～16g小白鼠，每只0.5ml，注射后第3天和第7天各觀察一次，允許皮下有硬結(jié)，但應(yīng)健存。
7.3 化學(xué)檢定
按《生物制品化學(xué)規(guī)定規(guī)程》進(jìn)行。
7.3.1pH值測定
應(yīng)為5.5～6.8。
7.3.2 游離甲醛測定
應(yīng)含游離甲醛，但含量應(yīng)≤0.01%。
7.3.3 氫氧化鋁含量測定
每ml應(yīng)不超過1.25mg。
7.3.4 氯化鈉含量測定
應(yīng)為0.8～0.95%。
7.3.5硫柳汞含量測定
不應(yīng)超過0.01%。
7.4 效力和鑒別試驗(yàn)
將疫苗4倍遞增稀釋，每個稀釋度接種BALB/cH2d或NIHq型雌性小白鼠20只，每只腹腔注射1.0ml，4～6周后采血，以RIA法測定抗-HBs，計算小白鼠ED50值與參比苗ED50值，結(jié)果以檢品ED50值/參比ED50值，其比值≥1為合格。
7.5 抗-HBc檢測
每批用6只體重為300～350g同性豚鼠，每只腹部皮下注射疫苗0.5ml，間隔一個月免疫第2次，之后一個月心臟采血，用RIA法檢測免疫前后血清，結(jié)果抗-HBc應(yīng)陰性，否則應(yīng)重試。
7.6人體免疫觀察及標(biāo)準(zhǔn)
每年度生產(chǎn)的頭3批疫苗或前、中、后各一批疫苗進(jìn)行人體免疫觀察，觀察對象為小學(xué)生或?qū)W齡前兒童，按0、1、2個月程序每批至少接種20人，每人于上臂三角肌肌內(nèi)注射1.0ml，于3針接種后一個月采血，用RIA法測定三項(xiàng)指標(biāo)，抗-HBs陽性率（S/N≥10)大于90%，6個月內(nèi)未出現(xiàn)HBsAg者判為合格，否則需要重試。對免疫后單獨(dú)出現(xiàn)高滴度抗-HBc者應(yīng)分析原因。
8 保存與效期
保存于2～8℃暗處，不得凍結(jié)。自檢定合格之日起效期為2年。
