總之，自Gall 和Pardue 1969年建立雜交免疫細(xì)胞化學(xué)以來的20余年中，已有不少新的改良的方法出現(xiàn)，但基本原則仍為Gall和Pardue所建立的相仿。作者個人體會是任何方法需在本人的實驗實踐中加以體驗和改良。比如目前對乙酰基化作用，即浸入醋酸酐和三乙醇胺是否能減低背景染色的問題有作者對此提出異議。在科技工作者認(rèn)為在原位雜交實驗的所有應(yīng)用溶液中加入0.1%～0.2%的二乙基焦碳酸乙酯（diethyl pyrocarbonate, DEPC)能有效的減低背景染色，但有些作者對此持懷疑態(tài)度。蛋白酶K的消化作用曾被認(rèn)為是增加細(xì)胞或組織滲透性的關(guān)鍵步驟，但有作用在自身的實驗室實踐中體會除結(jié)構(gòu)較致密的組織如腦、脊髓等外，對培養(yǎng)或涂片的單層細(xì)胞、蛋白酶K的消化及預(yù)雜交均是可以省略的。本文列舉各作者的操作步驟略有不同，可能是基于這個原因。
目前，原位雜交技術(shù)主要應(yīng)用于基因組圖（Gene mapping)，基因表達(dá)定位（localization of gene expression)，核DNA和RNA的排列，mRNA的排列和運輸（arrangement and transport of mRNA)，復(fù)制（replication)和細(xì)胞的分類（sorting of cells)。臨床研究應(yīng)用在細(xì)胞遺傳學(xué)（Cytogenetics)，生前診斷（Prenatal diagnosis)，腫瘤和傳染性疾病的診斷，生物學(xué)劑量測定（biological dosimetry)和病毒學(xué)的病原學(xué)診斷等。隨著核酸探針的制備，標(biāo)記方法和基本操作方法的不斷改進，新的技術(shù)不斷涌現(xiàn)，相信在不久的將來，原位雜交化學(xué)技術(shù)將會更廣泛的被應(yīng)用于各個學(xué)科，并不斷為生命科學(xué)提供新的資料，開拓新的領(lǐng)域。
參考文獻(xiàn)
1. Gall G & pardue ML.Formation and detection of RNA ╟ DNA hybrid molecules in cytological preparations. Proc Nat Acad Science.U.S.A,1969,63:378～ 381
2.Glaid,et al. The use of complementary RNA probes for the identification and localisation of peptide messenger RNA in diffuse neuroen－docrine system. In : in situ hybridisation, Application to developmental biology and medicine Eds:N1 Narris and D.G Wilkinson, Combridge University press, 1990,43～68
3.Coulton G.Non – radiosotopic labele for in situ hybridization histochemstry: a histochemist’s view. In: in situ hybridization,application to developmental biology and medicine. Eds: N1 Narris and Dg wilkinson, Combridge university Press, 1990:PP1～32
4.Plak JM,Mcgee JOD(Eds).In situ hybridisation principles and practice. New York :Oxford Oxford University Press, 1991
5.Forster AC, et al. Non-radioactive hybridisation probes prepared by chemical labelling of DNA and RNA with a novel reagent photobitio.Nuci Acids Res, 1985;3:745 ～761
6.Bagasra O, et al. Polymerase Chain Reaction in situ:intracellular amplificaton and detection of HIV –1 proviral DNA and other specific genes. J. Immunological Methods, 1993;158～145
7.Behringer Man heim, Biochemica. Neuradioactive in situ hybridisation application Manoal, 1992
8.Cai WQ(蔡文琴),et al. In situ hybridisation of atrial natriuretic peptide mRNA in the endothelial cells of human umbilical vessels. Histo－chemistry, 1993;100:277 ～ 283
9.Koch J, et al. Oligonucleotide – priming methods for the chromosome – specific labelling of alpha satellite DNA in situ. Chromosoma,1989;98:259～ 265
10. Barbara T, Pinkel D. Fluorescence in situ hybridisation with DNA probes. In : Flow cytometry (Eds zbigniew Darzynkiewice and Harry A.Crissman ) Academin press Inc, 1990;383～400
11. Liesi P, et al. Specific detection of neuronal cell bodies in situ hybridisation with a biotin – labelled neurofilament cDNA probe J. His－tochem Cytochem, 1986 July;34(7):923～926
12. 正向華，蔡文琴，等.用光敏生物素反意生長抑素(SS)cRNA探針顯示組織切片中ss mRNA。解剖學(xué)雜志，1992，15（4)：312～313
13.正向華,張俐.應(yīng)用反意生長抑素cRNA探針原位雜交顯示大鼠下丘腦生長抑素mRNA.解剖學(xué)雜志,1990,13(4):307
14.何彬,等.一種快速敏感的原位雜交方法.解剖學(xué)雜志,1992;15(4):312～313
15.向正華,蔡文琴,等.原位雜交組織化學(xué)與免疫組織化學(xué)結(jié)合法的研究.解剖學(xué)雜志,1993,16:451～454
