原位雜交技術(shù)在染色體和電鏡水平的應(yīng)用

原位雜交免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)的應(yīng)用除在培養(yǎng)的離散細(xì)胞涂片和各種組織制片如恒冷箱冷凍切片、石蠟包埋切片外，又進(jìn)一步擴(kuò)展到染色體鋪片和電鏡水平�，F(xiàn)分別予以介紹。[詳細(xì)]

2007/12/3 11:03:45

原位雜交技術(shù)在染色體鋪片的應(yīng)用

近年，不少科技工作者將原位雜交組織細(xì)胞化學(xué)技術(shù)（ISHH）應(yīng)用于細(xì)胞分裂中期（Metaphase）和分裂間期（Interphase）的染色體鋪片上，利用標(biāo)記的核苷酸探針與之進(jìn)行雜交，可在光鏡或電鏡水平檢測到不同的特異性的標(biāo)記物。目前，原位雜交組織化學(xué)在染色體鋪片的應(yīng)用主要在三個方面：染色體的基因分配[詳細(xì)]

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原位分子雜交技術(shù)在電鏡水平的應(yīng)用

自Gall和Pardue建立了原位雜交技術(shù)以來近20余年內(nèi)，這一技術(shù)為基因的定位和表達(dá)、基因進(jìn)化、發(fā)育生物學(xué)、腫瘤學(xué)、微生物學(xué)、病毒學(xué)、醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)和遺傳分析等領(lǐng)域研究提供了極其寶貴的資料，發(fā)揮了其它技術(shù)難以取代的作用。近年來，此一技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域逐漸擴(kuò)大并在兩個主要進(jìn)行了技術(shù)法的改進(jìn)。一方面是應(yīng)用一系[詳細(xì)]

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聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用概述

聚合酶鏈反應(yīng)或多聚酶鏈反應(yīng)（Polymerase Chain Reaction, PCR），又稱無細(xì)胞克隆技術(shù)(“free bacteria”cloning technique)，是一種對特定的DNA片段在體外進(jìn)行快速擴(kuò)增的新方法。該方法一改傳統(tǒng)分子克隆技術(shù)的模式，不通過活細(xì)胞，操作簡便，在數(shù)小時內(nèi)[詳細(xì)]

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PCR技術(shù)的原理

PCR是體外酶促合成特異DNA片段的新方法，主要由高溫變性、低溫退火和適溫延伸三個步驟反復(fù)的熱循環(huán)構(gòu)成：即在高溫（95℃）下，待擴(kuò)增的靶DNA雙鏈?zhǔn)軣嶙冃猿蔀閮蓷l單鏈DNA模板；而后在低溫（37～55℃）情況下，兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補(bǔ)的單鏈DNA模板結(jié)合，形成部分雙鏈；在Taq酶的最適溫度[詳細(xì)]

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PCR操作范例及反應(yīng)體系的組成

一、PCR操作范例　　在一個典型的PCR反應(yīng)體系中需加入：適宜的緩沖液、微量的模板DNA、4×dNTPs、耐熱性多聚酶、Mg2+和兩個合成的DNA引物。模板DNa 94℃變性1min，引物與模板40～60℃退火1min，72℃延伸2min。在首次循環(huán)前模板預(yù)變性3～5min；在末次循環(huán)后，樣品仍需繼[詳細(xì)]

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影響PCR的主要因素

PCR技術(shù)必須有人工合成的合理引物和提取的樣品DNA，然后才進(jìn)行自動熱循環(huán)，最后進(jìn)行產(chǎn)物鑒定與分析。引物設(shè)計與合成目前只能在少數(shù)技術(shù)力量較強(qiáng)的研究院、所進(jìn)行，臨床應(yīng)用只需購買PCR檢測試劑盒就可開展工作，PCR自動熱循環(huán)中影響因素很多，對不同的DNA樣品，PCR反應(yīng)中各種成份加入量和溫度循環(huán)參數(shù)均不[詳細(xì)]

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PCR各處應(yīng)用模式

一、兼并引物（Degenerate Primer）PCR　　密碼子具有兼并性，如表22-4，單以氨基酸順序推測編碼的DNA序列是不精確的，但可以設(shè)計成對兼并引物，擴(kuò)增所有編碼已知順序的核酸序列。用兼并引物時寡核苷酸中核苷酸序列可以改變，但核苷酸的數(shù)量應(yīng)相同。兼并度越低，產(chǎn)物特異性越強(qiáng)，設(shè)計引物時應(yīng)盡[詳細(xì)]

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樣品處理與注意事項

一、樣品處理　　DNA是染色體的主要組成部分，是PCR的擴(kuò)增模板。要進(jìn)行PCR，研究DNA結(jié)構(gòu)與功能或者用于診斷目的，首先必須從生物體內(nèi)提取DNA。DNA往往以核蛋白形式存在，其分子量大（人的染色體DNA平均大小為3.0×109bp），提取DNA應(yīng)盡量保持DNA完整性和純度，即在提取中盡量避免機(jī)械張[詳細(xì)]

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PCR儀器的發(fā)展

PCR溫度循環(huán)至關(guān)重要，PCR擴(kuò)增儀各參數(shù)必須準(zhǔn)確。自Perkin –Elmer Cetus公司第一臺PCR擴(kuò)增儀問世以來，現(xiàn)已有幾十家不同的廠家在國內(nèi)外生產(chǎn)和銷售PCR擴(kuò)增儀。在短短的幾年間，擴(kuò)增儀經(jīng)過幾代的發(fā)展，不斷采用新技術(shù)，并且進(jìn)一步朝方便、實用、高智能化和自動化的方向發(fā)展�！　榱吮阌诹私�[詳細(xì)]

2007/12/3 11:03:41

PCR臨床應(yīng)用領(lǐng)域及特點

一、PCR應(yīng)用特點　　1．操作簡便目前PCR技術(shù)采用耐高溫Taq DNA聚合酶，并且在有電腦控制的DNA擴(kuò)增儀中進(jìn)行，使操作大為簡化，一次加入的酶即可滿足反應(yīng)全過程。DNA擴(kuò)增儀能自動迅速升降溫度，只需把反應(yīng)所需的全部材料混勻，置入儀器內(nèi)，反應(yīng)便依所輸入的程序進(jìn)行�！　�2．省時應(yīng)用TaqDNA聚合酶[詳細(xì)]

2007/12/3 11:03:38

其它鏈擴(kuò)增技術(shù)及應(yīng)用范圍

一、免疫PCR　　所謂免疫（Immune PCR）就是利用抗體與DNA特異結(jié)合來檢測抗原，把抗原抗體反應(yīng)與PCR聯(lián)合應(yīng)用而建立的一種抗原檢測系統(tǒng)�！　≡诿庖逷CR中，一個中介分子同時具有與DNA、抗體分子特異結(jié)合的能力。其一端連接DNA（標(biāo)記物），另一端連接抗原-抗體復(fù)合物，形成一個特殊的抗原-抗體[詳細(xì)]

2007/12/3 11:03:38

DNA重組技術(shù)及其在基因診斷中的應(yīng)用

基因工程的基本技術(shù)是人工進(jìn)行基因的剪切、拼接、組合。基因是一段具有一定功能的DNA分子，要把不同基因的DNA線形分子片段準(zhǔn)確地切出來，需要各種限制性核酸內(nèi)切酶（restriction endonuclease）；要把不同片段連接起來，需要DNA連接酶（ligase）；要結(jié)合基因或其中的一個片段，需要[詳細(xì)]

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分子克隆載體

載體（vector）是指運(yùn)載外源DNA有效進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)的工具。載體同外源DNA在體外重組成DNA重組分子，在進(jìn)入受體后形成一個復(fù)制子，即形成在細(xì)胞內(nèi)能獨(dú)自進(jìn)行自我復(fù)制的遺傳因子。因此，作為載體應(yīng)該滿足以下幾方面的要求：①有某種限制酶的一個切點，最好是有許多種限制酶的切點，而且每種酶的切點只有一個；[詳細(xì)]

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DNA重組實驗中常用的技術(shù)

一、質(zhì)粒DNA的提取及鑒定　　（一）質(zhì)粒DNA的提取及鑒定　　1．收獲細(xì)菌　�。�1）將2ml含相應(yīng)抗生素的LB液體培養(yǎng)基加入到通氣良好的15ml的試管中，接入一單菌落，于37℃劇烈振蕩培養(yǎng)過夜�！　。�2）將1.5ml培養(yǎng)物倒入1.5ml離心管中，用臺式離心機(jī)于4℃以12000g離心5min，將剩余的[詳細(xì)]

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遺傳病與腫瘤的基因診斷

從DNA水平上尋找確診遺傳病的指標(biāo)或探討遺傳病和腫瘤的病因等方面，已取得很大成績，這對產(chǎn)前診斷，早期確診和突變基因攜帶者的檢出等都有重要意義。所用的方法大體有以下幾種。　　一、分離基因進(jìn)行結(jié)構(gòu)分析　　利用DNA離體轉(zhuǎn)化，制備探針，制備基因文庫進(jìn)行篩檢，最后鑒定載體中插入DNA片段的特性等一系列技術(shù)，[詳細(xì)]

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“DNA指紋”與法醫(yī)鑒定

1979年Teffreys根據(jù)β珠蛋白基因座位近旁出現(xiàn)的RFLP頻率同測定的核苷酸總數(shù)，推算出人體基因組的遺傳異質(zhì)性約為每100個核苷酸中有一個差異。后在人體DNA隨機(jī)片段的文庫中分離出高度變異的超變區(qū)。從1982年起，分別在人的胰島素基因，α類珠蛋白基因，肌動蛋白基因和C-Ha-ras-1基因中陸[詳細(xì)]

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免疫細(xì)胞化學(xué)常用試劑介紹

一、固定劑　　大多數(shù)神經(jīng)激素、肽類物質(zhì)為水溶性，在用于免疫細(xì)胞化學(xué)研究之前，常需固定。但肽類和蛋白質(zhì)的物理、化學(xué)性質(zhì)不同，因而對不同的固定方法或固定劑的反應(yīng)也不盡相同。某些固定劑甚至可同時破壞和/或保護(hù)同一抗原的不同抗原決定簇。因此，在進(jìn)行免疫細(xì)胞化學(xué)研究之前，很有必要了解所要研究的物質(zhì)（蛋白質(zhì)或肽[詳細(xì)]

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原位雜交組織化學(xué)常用試劑及處理

一、雜交前準(zhǔn)備　�。ㄒ唬〥EPC水是經(jīng)DEPC處理過的滅菌蒸餾水�！　EPC即二乙基焦碳酸酯（diethylprocarbonate），可滅活各種蛋白質(zhì)，是RNA酶的強(qiáng)抑制劑。原位雜交在雜交及其以前的各步處理中，所有液體試劑都應(yīng)經(jīng)DEPC處理。方法是：取市售DEPc 1ml，加入1L待處理水（蒸餾[詳細(xì)]

2007/12/3 11:03:30

全血細(xì)胞培養(yǎng)染色體技術(shù)常用試劑配制

一、國內(nèi)實驗室應(yīng)用試劑配制　�。ㄒ唬┡囵B(yǎng)液　�。�1）RPMI1640培養(yǎng)液：稱取RPMI培養(yǎng)基9.8g，碳酸氫鈉1.9g、青霉素100u/ml，加雙蒸水至1000ml，調(diào)節(jié)　pH7.2～7.4無菌過濾凍存?zhèn)溆�。　�。?）小牛血清商品：成都生物制品廠�！　。�3）植物凝集素（PHA）：自制或成品（重慶藥[詳細(xì)]

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