注射用雙黃連(凍干)—黃芩甙和綠原酸的測定—高效液相色譜法

本方法采用高效液相色譜法測定注射用雙黃連（凍干)中黃芩甙和綠原酸的含量。

本方法適用于中藥制劑注射用雙黃連（凍干)。

供試品于容量瓶中，加30%甲醇溶液超聲溶解定容，過濾，濾液進(jìn)入高效液相色譜儀進(jìn)行色譜分離，用紫外吸收檢測器，于波長324nm處檢測黃芩甙和綠原酸的吸收值，計(jì)算出其含量。

1. 甲醇（色譜純)

2. 乙酸

3. 三乙胺

1. 儀器

1.1 高效液相色譜儀

1.2 色譜柱

Alltech C₁₈色譜柱（250×4.6mm，5μm)。

1.3 紫外吸收檢測器

2. 色譜條件

2.1 流動(dòng)相：A（5%冰乙酸甲醇溶液) B（0.5%三乙胺水溶液)梯度洗脫（0-35min，A:20-75%，B:80-25%)。

2.2 檢測波長：324nm

2.3 柱溫：室溫

1. 稱取供試品

精密稱取本品粉末（過五號(hào)篩-80目)試樣 50mg。

2 .對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芩甙和綠原酸對(duì)照品2.56mg和1.06mg，置25mL量瓶中，用30%甲醇水溶液超聲溶解，定容，溶液中二者的濃度分別為0.0512mg/mL和0.0212mg/mL，作為對(duì)照品溶液。

3. 供試品溶液的制備

將供試品置于50mL容量瓶中，加30%甲醇溶液超聲溶解定容，過濾，取續(xù)濾液為供試品溶液。

注：“精密稱取”系指稱取重量應(yīng)準(zhǔn)確至所取重量的千分之一�！熬�密量取”系指量取體積的準(zhǔn)確度應(yīng)符合國家標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)該體積移液管的精度要求。

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

精密吸取上述對(duì)照品溶液2，4，6，8，10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長324nm處測定黃芩甙和綠原酸的吸收值，以進(jìn)樣量對(duì)峰面積繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性回歸，得到回歸方程。

2. 供試品的測定

精密吸取供試品溶液10μL注入高效液相色譜儀，用紫外吸收檢測器，于波長324nm處測定黃芩甙和綠原酸的吸收值，計(jì)算出其含量。

馬洪波，鄧光瑞，李興斌等. 改進(jìn)HPLC法測定雙黃連粉針中黃芩甙和綠原酸的含量. 中醫(yī)藥學(xué)報(bào)，1999，（1)：59.