| 公開(公告)號 | CN1297670C |
| 公開(公告)日 | 2007.01.31 |
| 申請(專利)號 | CN200410083826.5 |
| 申請日期 | 2004.10.19 |
| 專利名稱 | 結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測試劑盒及其制備方法 |
| 主分類號 | C12Q1/68(2006.01)I |
| 分類號 | C12Q1/68(2006.01)I;C12Q1/18(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 中國人民解放軍第三○九醫(yī)院 |
| 發(fā)明(設(shè)計)人 | 吳雪瓊;梁建琴;張俊仙;李洪敏 |
| 地址 | 100091北京市海淀區(qū)黑山扈甲十七號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 北京北新智誠知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 耿小強 |
| 國省代碼 | 北京;11 |
| 主權(quán)項 | 一種結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測試劑盒，含有結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測膜片和結(jié)核分枝桿菌耐藥基因PCR擴增試劑，其特征在于：所述結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測膜片是在硝酸纖維膜上固定2個針對分枝桿菌屬和結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群16S核糖體核糖核酸而設(shè)計的寡聚核苷酸探針，以及一系列針對結(jié)核分枝桿菌耐藥基因rpoB、katG、embB、rpsL和rrs而設(shè)計的寡聚核苷酸探針，在3’末端加有80-110個脫氧核糖核酸；所述的結(jié)核分枝桿菌耐藥基因多重PCR擴增試劑包括5-10倍PCR緩沖液，濃度各為2.5mmol/L的dGTP、dCTP、dATP和dTTP，濃度各為2.5-12.5μmol/L的5’端帶生物素標(biāo)記的分枝桿菌16S rRNA、rpoB、katG、embB、rpsL和rrs基因的上游引物和不帶標(biāo)記的下游引物以及1-10U/μl Taq DNA聚合酶；所述結(jié)核分枝桿菌耐藥基因多重PCR擴增試劑各組分的終濃度如下：1倍PCR緩沖液，dGTP、dCTP、dATP和dTTP的終濃度各為0.2mmol/L，5’端帶生物素標(biāo)記的分枝桿菌16S rRNA、結(jié)核分枝桿菌rpoB、katG、embB、rpsL和rrs基因的上游引物和不帶標(biāo)記的下游引物的終濃度各為0.2-1.0umol/L，TaqDNA聚合酶2-5U/100μl。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測試劑盒及其制備方法，根據(jù)不同分枝桿菌屬和結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群16S核糖體核糖核酸(簡稱rRNA)而設(shè)計、合成相應(yīng)的寡核苷酸探針，通過點樣法將寡核苷酸探針按一定的順序點在經(jīng)預(yù)處理的硝酸纖維膜上，制成耐藥基因檢測鑒定膜片，與帶生物素標(biāo)記的PCR擴增產(chǎn)物雜交。利用本發(fā)明，根據(jù)探針雜交的藍(lán)紫色信號強弱用肉眼判讀結(jié)果，可用于檢測臨床標(biāo)本或臨床分離株中結(jié)核分枝桿菌五種抗結(jié)核藥物耐藥基因。 |
| 國際公布 |
