| 公開(公告)號 | CN1904150A |
| 公開(公告)日 | 2007.01.31 |
| 申請(專利)號 | CN200610029646.8 |
| 申請日期 | 2006.08.01 |
| 專利名稱 | 一種人胰高血糖素樣肽-1衍生物及其固相化學合成 |
| 主分類號 | C40B50/14(2006.01)I |
| 分類號 | C40B50/14(2006.01)I;C40B50/18(2006.01)I;C07K14/47(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 華東師范大學 |
| 發(fā)明(設計)人 | 徐 進;黃 靜;吳自榮;金 麗;葉海峰;易正芳 |
| 地址 | 200062上海市中山北路3663號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進入國家日期 | |
| 專利代理機構(gòu) | 上海德昭知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 |
| 代理人 | 程宗德;石 昭 |
| 國省代碼 | 上海;31 |
| 主權(quán)項 | 一種GLP-1衍生物的固相化學合成方法，其特征在于，具體操作步驟： (1)需用的帶保護基的氨基酸單體共有17個，它們是：Fmoc-L-Ala-OH、Fmoc-L-His(Trt)-OH、Fmoc-L-Val-OH、Fmoc-L-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-L-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-L-Gly-OH、Fmoc-L-Leu-OH、Fmoc-L-Thr(tBu)-OH、Fmoc-L-Gln(Trt)-OH、Fmoc-L-Phe-OH、Fmoc-L-Lys(Boc)-OH、Fmoc-L-Ser(tBu)-OH、Fmoc-L-I le-OH、Fmoc-L-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-L-Trp-OH、Fmoc-L-Cys(Trt)-OH、Fmoc-L-Arg(Pbf)-O-OH，其中縮寫表示： Fmoc：9-芴基甲氧羰基 Boc：叔丁氧羰基(tert-butyloxycarbonyl) Trt：三苯甲基(trityl) OtBu：叔丁基酯 tBU：叔丁基(tert-butyl) Pbf：2，2，5，7，8-五甲基苯并二氫吡喃-6-苯磺酰基； (2)需用的儀器設備及試劑 儀器：SYMPHONY型12通道多肽合成儀，型號：SYMPHONY，美國產(chǎn)品 試劑：N-甲基吡咯烷酮，二氯甲烷，六氫吡啶，甲醇，二甲氨基吡啶(Dimethylaminopyridine)/DMF N，N-二異丙基乙胺(N，N-diisopropylethylamine)/NMP，HBTU 100mmol/0.5M HOBT in DMFN，N-二環(huán)己基碳二亞胺(N，N-Dicyclohexylcarbodiimide)/NMP，其中：DMF為N，N-二甲基甲酰胺 NMP為N-甲基吡咯烷酮 HOBT為1-羥基苯并三唑 HBTU為2-(1氫苯并三唑基)——四甲基脲六氟磷酸鹽(2-(1H-benzotriazole-yl-1，3，3-tetramethyl-Uroniumhexafluoropho sphate)； (3)操作： 第一步多肽樹脂的合成 以0.25mmol規(guī)模為例，稱取王氏樹脂0.25g，置入SYMPHONY型12通道多肽合成儀上的反應器中，將帶保護基的氨基酸單體稱取1mmol裝瓶，按GLP-1衍生物的氨基酸序列(Seq ID No.2)從C-端向N-端排列在所述的合成儀中，25℃下，由計算機程序控制自動進行脫Fmoc保護、活化、連接，然后再進行下一輪循環(huán)，如此完成合成，得到帶側(cè)鏈保護基的多肽樹脂，在所述的合成儀上吹干、稱重； 第二步脫保護基及切斷樹脂 將第一步得到的帶側(cè)鏈保護基的多肽樹脂置于具塞三角燒瓶，加入下列裂解試劑：┏━━━━━━━┳━━━━━━━┓┃ 試劑 ┃ 用量 ┃┣━━━━━━━╋━━━━━━━┫┃ 水 ┃ 0.25mL ┃┃ EDT ┃ 0.25mL ┃┃ TIS ┃ 1mL ┃┃ 三氟乙酸 ┃ 9.45mL ┃┗━━━━━━━┻━━━━━━━┛，然后在30℃下，電磁攪拌反應2小時，過濾，收集濾液，樹脂用三氟乙酸洗滌，合并收集液與洗滌液，加入乙醚產(chǎn)生沉淀，過濾，沉淀用乙醚洗滌，干燥，得粗品； 第三步HPLC分離純化、冷凍干燥 將第二步得到的粗品用制備型HPLC進行分離純化，再經(jīng)冷凍干燥，得產(chǎn)品GLP-1衍生物。 |
| 摘要 | 一種具有人胰高血糖素樣肽-1活性的人胰高血糖素樣肽-1衍生物及其制備和應用，屬于生物工程技術(shù)領域。該衍生物的分子結(jié)構(gòu)式為以下的三種結(jié)構(gòu)式：GLP-1(7-37)-Xaa38(Seq ID No.2)，GLP-1(7-37)-Xaa38-Xaa39(Seq ID No.3)和GLP-1(7-37)-Xaa38-Xaa39-Xaa40(Seq ID No.4)之一，其中Xaa38，Xaa39和Xaa40分別是Cys，Ala，Gly，His，Ser和Thr中的任何一個氨基酸。采用固相化學合成制備該衍生物。該衍生物具有長于GLP-1的半衰期；通過固相化學合成制備，生產(chǎn)步驟少，生產(chǎn)成本低，特別適于在制備治療糖尿病的藥物中作該藥物的活性成分。 |
| 國際公布 |
