一種等溫反應檢測具序列特異性的DNA和RNA的方法
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公開(公告)號
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CN1810989A
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公開(公告)日
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2006.08.02
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申請(專利)號
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CN200510036871.X
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申請日期
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2005.08.31
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專利名稱
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一種等溫反應檢測具序列特異性的DNA和RNA的方法
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主分類號
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C12Q1/68(2006.01)I
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分類號
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C12Q1/68(2006.01)I
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權
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申請(專利權)人
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中國科學院廣州分院
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發(fā)明(設計)人
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彭 濤
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地址
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510070廣東省廣州市先烈中路100號
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頒證日
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國際申請
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進入國家日期
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專利代理機構
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廣州科粵專利代理有限責任公司
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代理人
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余炳和
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國省代碼
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廣東;44
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主權項
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一種等溫反應檢測目的基因方法，在恒溫條件下探針與目標基因結合，后通過切刻內切酶作用來檢測目的基因，其特征在于： 設計單鏈DNA“報告探針”，所說的“報告探針”與目標基因序列的核酸切刻內切酶識別序列及及其周圍序列部分互補，并可使切刻內切酶在報告探針切刻； 按以下步驟進行目的基因檢測： 1.1、在待檢測樣品的DNA或RNA中加入“報告探針”及切刻內切酶，“報告探針”與含有切刻內切酶識別序列的目標基因序列雜交后兩識別序列結合形成切刻內切酶識別位點，該位點僅可使切刻內切酶在“報告探針”鏈切刻，形成兩段較短的片段，在此反應溫度下，短片段形成的雙鏈不穩(wěn)定，會與“核驗探針”脫落，成為5’部分“報告探針”和3’部分“報告探針”； 1.2、被切刻的“報告探針”分離的目的基因，又與另一完整的“報告探針”雜交，重復1.1所述反應，產生新的5’部分“報告探針”和3’部分“報告探針”； 1.3、通過檢測產生的3’部分“報告探針”和/或5’部分“報告探針”顯示是否有目的基因序列存在。
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摘要
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一種等溫反應檢測具序列特異性的DNA和RNA的方法，通過在特異探針中設計DNA切刻內切酶的識別位點，在DNA探針與目標序列雜交后，DNA切刻內切酶將探針切刻為兩段，從而降低了其與目標序列結合的穩(wěn)定性并與目標序列分離。目標序列因此能與另一完整探針再次雜交并被切刻內切酶切刻。如此循環(huán)。切刻下的小片段可應用凝膠電泳的方法、熒光識別儀、顏色變化、傳感器、質譜、檢驗層析試條或微陣列系統(tǒng)來檢測特定產物的存在。該方法可以在等溫情況下使待檢基因呈線性或指數增加，使反應在短時間內就能完成，因而具有快速、靈敏、特異、應用范圍廣等特點�？蓱糜诎▌游铩⒅参锖臀⑸锏幕驒z測。
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國際公布
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