| 公開(公告)號 | CN1289678C |
| 公開(公告)日 | 2006.12.13 |
| 申請(專利)號 | CN02109840.9 |
| 申請日期 | 2002.06.13 |
| 專利名稱 | 高表達(dá)、高純度、高活性基因重組人溶菌酶的生產(chǎn)及用途 |
| 主分類號 | C12N15/81(2006.01)I |
| 分類號 | C12N15/81(2006.01)I;C12N1/19(2006.01)I;C12N9/36(2006.01)I;C12N15/56(2006.01)I;A61K38/47(2006.01)I;A61P31/00(2006.01)I;A61P31/04(2006.01)I |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 長春奇龍生物技術(shù)研究所;香港國升實(shí)業(yè)有限公司;深圳市九益祥實(shí)業(yè)有限公司 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 安 米;張 華;李 元;安獻(xiàn)祿 |
| 地址 | 130022吉林省長春市人民大街179－12號B座13樓3號 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 吉林長春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司 |
| 代理人 | 王 薇 |
| 國省代碼 | 吉林;22 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種基因重組人溶菌酶的生產(chǎn)方法，其特征在于：基因工程人溶菌酶的提取純化工藝：將含有基因工程表達(dá)的人溶菌酶的畢赤酵母菌培養(yǎng)液用10-50萬截流分子量膜超濾，收集濾液；用5000截流分子量超濾，收集濃液；濃液上羧甲基纖維素，洗脫緩沖液洗脫，收集洗脫液，過G-50柱除鹽，冰凍干燥，測定蛋白量和溶菌酶活性；生產(chǎn)步驟如下：1、搖床種子制備：以配制200毫升培養(yǎng)基為基準(zhǔn)，用H3PO4(磷酸)6毫升、MgSO4(硫酸鎂)3克，K2SO4(硫酸鉀)4克，KOH(氫氧化鉀)1克，CaSO42H2O(硫酸鈣)1.5克等成份，加蒸餾水至200毫升，高壓來菌后接種甘油管種子，搖床轉(zhuǎn)數(shù)為每分鐘250轉(zhuǎn)，培養(yǎng)溫度為20-35℃，在恒溫床上培養(yǎng)36-48小時(shí)；2、種子罐培養(yǎng)：以種子罐最大體積1升為基準(zhǔn)，配制培養(yǎng)基用H3PO4(磷酸)27毫升，MgSO4(硫酸鎂)15克，CaSO42H2O(硫酸鈣)0.6克，K2SO4(硫酸鉀)18克KOH(氫氧化鉀)4.12克，加蒸餾水至500毫升，高壓來菌后接種搖床種子；發(fā)酵反應(yīng)器操作參數(shù)溫度為20-32℃，PH值為2.0-8.0。溶解氧濃度為10-60％；當(dāng)培養(yǎng)液中的細(xì)胞密度提高至OD200左右，種子培養(yǎng)結(jié)束；3、生產(chǎn)罐培養(yǎng)：以10升為生產(chǎn)罐配制培養(yǎng)基，用H3PO4(磷酸)95毫升，MgSO4(硫酸鎂)53克，CaSO42H2O(硫酸鈣)21克，K2SO4(硫酸鉀)63克，KOH(氫氧化鉀)15克加蒸餾水至7升，高壓來菌后接種種子罐種子，發(fā)酵反應(yīng)器操作參數(shù)為溫度控制在25-32℃，PH值為4.0-8.0，溶解氧濃度為10-60％；當(dāng)培養(yǎng)液中細(xì)胞達(dá)到一定密度后，向培養(yǎng)液中流加甲醇誘導(dǎo)，此階段的持續(xù)時(shí)間50-60小時(shí)，然后放罐培養(yǎng)結(jié)束。 |
| 摘要 | 本發(fā)明涉及一種高表達(dá)、高純度、高活性基因重組人溶菌酶的生產(chǎn)方法及其新用途。提供了利用提取純化的基因工程技術(shù)表達(dá)的人溶菌酶的溶菌活性，用于臨床上細(xì)菌和真菌的感染，特別是耐藥性細(xì)菌感染的治療方法，以及革蘭陰性菌感染治療后內(nèi)毒素引發(fā)的后遺癥的治療方法。提供了用于各種治療用途的抗生素和人溶菌酶的藥用組合物。 |
| 國際公布 |
