公開(公告)號
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CN1701124A
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公開(公告)日
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2005.11.23
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申請(專利)號
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CN03824462.4
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申請日期
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2003.09.26
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專利名稱
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檢測HBV復(fù)制和測試藥物敏感性的方法
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主分類號
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C12Q1/70
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分類號
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C12Q1/70
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分案原申請?zhí)? |
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優(yōu)先權(quán)
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2002.9.27 EP 02356188.9
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申請(專利權(quán))人
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國家健康醫(yī)學(xué)研究所
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發(fā)明(設(shè)計)人
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D·迪朗泰爾;S·迪朗泰爾;C·特雷波;F·祖里姆
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地址
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法國巴黎
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頒證日
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國際申請
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2003-09-26 PCT/EP2003/012398
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進(jìn)入國家日期
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2005.04.21
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專利代理機(jī)構(gòu)
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中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利商標(biāo)事務(wù)所
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代理人
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程 泳
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國省代碼
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法國;FR
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主權(quán)項
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可能存在藥物產(chǎn)品優(yōu)選地抗病毒劑的情況下,用于測量HBV復(fù)制能力的方法,所述HBV例如為存在于生物樣品中的HBV,該方法包括:(a)可能地提取包含在生物樣品中的核酸;(b)使用至少兩對引物進(jìn)行PCR以擴(kuò)增HBV核酸,所選的所述兩對引物能夠獲得至少兩個不同的HBV基因組擴(kuò)增片段,這兩個片段通過組裝代表了一個線性連續(xù)的、能轉(zhuǎn)錄出pgRNA的DNA序列;(c)將由(b)中獲得的片段克隆入載體,該片段處于異源啟動子控制下,因此產(chǎn)生包含一段線性連續(xù)的、在所述啟動子控制下的能轉(zhuǎn)錄出pgRNA的DNA序列的載體;(d)用所述載體轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)感受態(tài)細(xì)胞;(e)在允許從克隆的HBVDNA合成HBVpgRNA的條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞;(f)可能地用藥物產(chǎn)品特別是抗病藥劑處理培養(yǎng)細(xì)胞;并且(g)可能地在藥物產(chǎn)品優(yōu)選地抗病毒劑存在的情況下,根據(jù)病毒基因表達(dá)和/或病毒復(fù)制的情況確定HBV的復(fù)制能力。
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摘要
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可能在有藥物產(chǎn)品優(yōu)選地抗病毒劑存在的情況下,用于測量HBV復(fù)制能力的方法,例如存在于生物樣品中的HBV。該方法包括:(a)可能地提取包含在生物樣品中的核酸;(b)使用至少兩對引物進(jìn)行PCR以擴(kuò)增HBV的核酸,所選的兩對引物能夠獲得至少兩個不同的HBV基因組擴(kuò)增片段,這兩個片段通過組裝代表了一個線性連續(xù)的、能轉(zhuǎn)錄出pgRNA的DNA序列;(c)將由(b)中獲得的片段克隆入載體,該片段處于異源啟動予控制下,于是就產(chǎn)生一個包含一段線性連續(xù)的、在所述啟動子控制下能轉(zhuǎn)錄出pgRNA的DNA序列的載體;(d)用所述載體轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)感受態(tài)細(xì)胞;(e)在允許從克隆的HBV DNA合成HBV pgRNA的條件下培養(yǎng)轉(zhuǎn)染或轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞;(f)可能地用藥物產(chǎn)品特別是抗病毒劑處理培養(yǎng)細(xì)胞;并且(g)可能地在藥物產(chǎn)品優(yōu)選地抗病毒劑存在的情況下,根據(jù)病毒基因表達(dá)和/或病毒復(fù)制的情況確定HBV的復(fù)制能力。
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國際公布
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2004-04-08 WO2004/029301 英
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