| 公開(公告)號(hào) | CN1327851C |
| 公開(公告)日 | 2007.07.25 |
| 申請(qǐng)(專利)號(hào) | CN200510108351.5 |
| 申請(qǐng)日期 | 2005.10.12 |
| 專利名稱 | 一種促肝細(xì)胞生長(zhǎng)蛋白質(zhì)的制備工藝及其注射劑制備方法 |
| 主分類號(hào) | A61K35/407(2006.01)I |
| 分類號(hào) | A61K35/407(2006.01)I;A61K9/08(2006.01)I;A61K9/19(2006.01)I;A61K38/27(2006.01)I;A61P1/16(2006.01)I |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專利權(quán))人 | 郭斌閣 |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 郭斌閣 |
| 地址 | 110003遼寧省沈陽(yáng)市和平區(qū)和平南大街35號(hào)瑪莉藍(lán)大廈1602室 |
| 頒證日 | |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 北京華科聯(lián)合專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 王 為 |
| 國(guó)省代碼 | 遼寧;21 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種促肝細(xì)胞生長(zhǎng)素的制備方法，經(jīng)過以下步驟： (1)對(duì)獲得的乳�；蛉樨i的新鮮肝臟進(jìn)行刺激； (2)分散乳化使細(xì)胞破碎； (3)加入溶劑并加熱； (4)冷凍沉淀； (5)離心得到粗提液； (6)柱層析得洗脫液； (7)洗脫液用超濾膜超濾，純化得2～4萬(wàn)道爾頓區(qū)間的藥物活性蛋白質(zhì)；其特征在于，步驟1中所述刺激是乳�；蛉樨i宰殺后應(yīng)立即取肝臟，用刀立即將肝臟分割成6-8塊、4℃放置1小時(shí)；步驟2中所述分散乳化使細(xì)胞破碎是，將步驟1刺激后的肝臟用絞肉機(jī)打成0.5cm的小塊，然后以分散乳化機(jī)乳化20分鐘，得到細(xì)膩均勻、呈乳白色的分散乳化液；步驟3中所述加入溶劑并加熱是，將步驟2得到的分散乳化液加入3倍體積pH3.5的0.84％的鹽水。加入十二烷基肌氨酸鈉使終濃度達(dá)到0.05％，攪拌1小時(shí)，對(duì)提取液加熱，至料液溫度80℃恒溫15分鐘，接著加熱至90℃恒溫20分鐘；步驟4中所述冷凍沉淀是用水冷卻至室溫，轉(zhuǎn)入4℃冷庫(kù)存放48小時(shí)，以沉淀油脂、雜蛋白和十二烷基肌氨酸鈉；步驟5中所述離心得到粗提液，是取上清液，用無(wú)紡布過濾，用離心機(jī)離心，得澄清的粗提液；步驟6中所述的柱層析是將粗提液上層析柱，所述層析柱介質(zhì)是陰離子或陽(yáng)離子交換樹脂，選自：陰離子大孔樹脂、DE32-纖維素、DE52-纖維素、DEAE-SEPHADEX、DEAE-SEPHAROSE陽(yáng)離子大孔樹脂、CM-纖維素、CM-SEPHADEX、CM-SEPHAROSE。粗提液上層析柱后，先后用pH為8.0的含氯化鈉0.20M的0.05mol/LTris-HCl溶液的A洗液和pH為8.0的含氯化鈉0.70M的0.05mol/LTris-HCl溶液的B洗液洗脫，收集洗脫液；步驟7中所述洗脫液用超濾膜超濾，是以分子量為4萬(wàn)和1萬(wàn)道爾頓的超濾膜超濾，得到2-4萬(wàn)道爾頓區(qū)間的蛋白質(zhì)。 |
| 摘要 | 本發(fā)明公開了一種促肝細(xì)胞生長(zhǎng)蛋白質(zhì)的制備工藝及其注射劑制備方法，步驟是：出生一個(gè)月內(nèi)的乳�；蛉樨i的肝臟用絞肉機(jī)絞碎，采用分散乳化機(jī)分散20分鐘，加入含0.05％的十二烷基肌氨酸鈉，破碎細(xì)胞，加熱、泠沉沉淀雜蛋白，離子交換等純化方法獲得。其中的主要有效成分2.1萬(wàn)道爾頓蛋白質(zhì)含量大于60％。含量測(cè)定、藥效學(xué)和毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，本發(fā)明的促肝細(xì)胞生長(zhǎng)蛋白質(zhì)及其注射劑取材更方便容易，成本降低，藥理藥效與前人研究結(jié)果相當(dāng)。 |
| 國(guó)際公布 |
