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2．1．2 Bb的染色及鏡檢
挑取直徑l mm左右、半透明、光滑、濕潤的典型菌落進行革蘭氏染色，將革蘭氏陰性、兩極著色、散在或成對排列、呈細小球桿狀菌的菌落定為可疑菌落。對可疑菌落進行傳代純化，用于繼續(xù)鑒定。也可以將病料或初代分離的細菌接種小鼠，對死亡小鼠剖檢，取心血分離鑒定細菌，以提高菌株的分離率和毒力。
2．1．3 Bb的生化鑒定
Bb的特征性生化反應包括氧化／發(fā)酵(O／F)、葡萄糖磷酸鹽胨水(MR、VP肉湯)、西蒙氏枸櫞酸鈉、葡萄糖、乳糖、吲哚、硫化氫、硝酸鹽還原、尿素、觸酶和氧化酶、液化明膠等。將Bb接種于上述生化反應管中，Bb尿素酶試驗陽性、,能利用檸檬酸鹽、還原硝酸鹽、不產(chǎn)生靛基質(zhì)、不產(chǎn)生硫化氫、MR和VP試驗均為陰性、不液化明膠，不氧化也不發(fā)酵包括葡萄糖在內(nèi)的所有糖。
2．1．4 Bb的致病性實驗
對分離的Bb需進行動物致病性實驗以確定其毒力和致病性。實驗動物可以為小鼠、豚鼠或豬。將Bb分離株通過氣管注射和滴鼻途徑接種30日齡仔豬進行感染試驗，接種豬出現(xiàn)呼吸系統(tǒng)癥狀，采集感染豬鼻拭子，進一步分離鑒定Bb。陳武森等選用豚鼠作為實驗動物醫(yī).學全.在.線網(wǎng)站m.bhskgw.cn，將臨床分離的致病波氏桿菌I相菌的肉湯培養(yǎng)物通過腹腔注射，解剖觀察有皮下、腸、肝、心出血，伴有腹水、膽囊腫大等病變，隨后從死亡豚鼠組織中分離鑒定細菌。
2．2 Bb的血清學鑒定
Bb的血清學鑒定方法包括使用Bb標準陽性血清和Bb的O(菌體抗原)、K(莢膜抗原)因子抗血清作平板凝集實驗。將Bb分離菌株的24 h培養(yǎng)物分別與Bb標準陽性血清混合，如產(chǎn)生凝集反應而與陰性對照血清無反應者為Bb。
Bb具有由莢膜抗原和菌毛抗原組成的K抗原和菌體O抗原，故可以使用Bb O、K因子抗血清作平板凝集實驗。Bb I相菌表面K抗原將菌體O抗原完全遮閉，因此它只能與抗K因子血清發(fā)生凝集反應。III相菌不具有表面K抗原，只有菌體O抗原，因此它只能與抗O因子血清發(fā)生凝集反應。II相菌介于I相菌和III相菌之間，具有表面K抗原，但不能將菌體O抗原全部遮閉，因此它與K因子血清和O因子血清均能發(fā)生凝集反應。
2．3 Bb的分子生物學鑒定方法
關(guān)于Bb分子機制等方面的研究已經(jīng)較為深入，然而關(guān)于Bb檢測方法的報道卻很少。僅有利用核糖分型法、脈沖凝膠電泳法和限制性酶切分析法來檢測Bb的報道，然而這些方法都是用于區(qū)分不同宿主間Bb的同源性，并不適合于臨床診斷�，F(xiàn)今用于支氣管敗血波氏桿菌的分子生物學鑒定方法包括菌落雜交分析法和PCR法。
2．3．1菌落雜交分析法鑒定Bb
美國Register等應用雙色雜交法同時檢測Bb和TPm。通過雙熒光標記的抗體可以同時雜交4700 bp的BbalcA基因和大小l 200 bp的T+Pm toxA基因探針，alcA為地高辛標記，雜交后有Bb存在處顯粉紅色，取樣3 d后即可獲得結(jié)果。檢測表現(xiàn)AR臨床癥狀的84份鼻拭子樣品，檢測結(jié)果與其他常規(guī)鑒定方法對比有極高的敏感性和特異性，而且該法是一種菌落雜交分析法，鑒定細菌從初級培養(yǎng)物中的單一菌落挑選，不需要對受檢細菌進行純代培養(yǎng)，但是操作過程復雜，需要專門的研究技術(shù)人員才能完成。因此，該方法的普遍利用還有一定的局限性。www.powerpigs.net
2．3．2 PCR方法檢測Bb
Hozbor等針對Bb鞭毛基因的上游序列設(shè)計的引物建立了PCR的檢測方法，該方法可以擴增出Bb特異性的大小為237 bp的片段，并能夠和百日咳波氏桿菌(B．pertussis)及副百日咳波氏桿菌(B．psrapertussis)區(qū)別開。且細菌只需要經(jīng)過初代培養(yǎng)即可作為PCR的模板使用醫(yī)學.全在.線m.bhskgw.cn，該法具有很好的特異性和敏感性，細菌量少于l0個的樣本也可以直接檢出。國內(nèi)魯承等利用多重PCR方法可以同時鑒定Bb和T+Pm感染。使用PCR方法不需做目的菌的分離培養(yǎng)，在高濃度的目的菌存在時，不必做增菌培養(yǎng)，可直接從所采取的鼻腔分泌物中分離DNA應用于檢測，并且不必考慮雜菌的過度增殖，為臨床上確定豬傳染性萎縮性鼻炎病原菌感染建立了新途徑。楊詠潔等證實PCR檢測的檢出率是細菌檢查法的5．25倍，是微量凝集法的1．75倍，具有較好的特異性和敏感性。
綜上所述，豬源支氣管敗血波氏桿菌是豬的重要病原菌，現(xiàn)有的分離鑒定方法均存在實驗條件要求高、操作繁瑣等缺點，亟需開發(fā)更多靈敏性高、特異性好、可在現(xiàn)場使用的快速診斷方法。
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