免疫學和免疫學檢驗:第二節(jié)　均相酶免疫測定

一、酶擴大免疫測定技術

酶擴大免疫測定技術是最早取得實際應用的均相酶免疫測定方法，是由美國Syva公司研究成功并定名的。此法主要檢測小分子抗原或半抗原，在藥物測定中取得較多應用。酶擴大免疫測定技術（enzyme-multipliedimmunoassaytechnique，EMIT)試劑盒的商標取名為EMIT。

EMIT的基本原理是半抗原與酶結合成酶標半抗原，保留半抗原和酶的活性（圖15-2B)。當酶標半抗原與抗體結合后，所標的酶與抗體密切接觸，使酶的活性中心受影響而活性被抑制（圖15-2A)。EMIT試劑盒中的主要試劑為：①抗體，②酶標半抗原，③酶的底物。檢測對象為標本中的半抗原。當試劑①、②與標本混合后，標本中的半抗原與酶標的半抗原競爭性地與試劑中的抗體相結合。如標本中的半抗原量少，與抗體結合的酶標半抗原的比例增高，游離的具有酶活力的酶標半抗原的量就減少。因此在反應后酶活力大小一標m.bhskgw.cn/zhicheng/本中的半抗原呈一定的比例，從酶活力的測定結果就可推算出標本中半抗原的量。

圖15-2EMIT原理示意圖

二、克隆酶供體免疫測定

利用重組DNA技術制備β-半糖苷酶的兩個片段：大片段稱為酶受體（enzymeacceptor，EA)，小片段稱為酶供體（enzymedonor，ED)。兩個片段本身均不具酶活性，但在合適的條件下結合在一起就具有酶活性。利用這兩相片段的特性建立的均相酶免疫測定稱為克隆酶供體免疫測定（clonedenzymedonorimmunoassay,CEDIA)。CEDIA的反應模式為競爭法，測定原理為：標本中的抗原和ED標記的抗原與特異性抗體競爭結合，形成兩種抗原抗體復合物。ED標記的抗原與抗體結合后由于空間位阻，不再能與EA結合。反應平衡后，剩余的ED標記抗原與EA結合，形成具有活性的酶（圖15-3)。加入底物測定酶活力，m.bhskgw.cn/wsj/酶活力的大小與標本中抗原含量成正比。CEDIA主要用于藥物和小分子物質(zhì)的測定。

圖15-3CEDIA原理示意圖