本品系用減毒的黃熱病毒17D株接種雞胚，經(jīng)研磨、離心，取上清液凍干制成。專供進(jìn)入或經(jīng)過黃熱流行地區(qū)的人員預(yù)防黃熱之用。
1 毒種
1.1 毒種來源
減毒黃熱病毒17D株。
1.2 毒種檢定
1.2.1 無菌試驗(yàn)
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
1.2.2 純毒試驗(yàn)
用已知黃熱病毒免疫血清做中和試驗(yàn)，證明其為黃熱病毒。
1.2.3 猴體安全及效力試驗(yàn)
取凍干黃熱17D毒種，加無菌生理鹽水恢復(fù)其原液量，接種無黃熱病毒中和抗體之恒河猴10只，每只腦內(nèi)注射0.25ml（50000個(gè)小白鼠LD50)。注射后第2、4、6日各采血1次，分離血清，分別做10倍系列稀釋。以原血清及10-1～10-3各稀釋度的血清分別腦內(nèi)注射體重10～12g小白鼠6只，每只0.03ml，觀察21天，檢查病毒量，LD50均不得超過Log2（4天以內(nèi)死亡的小白鼠不計(jì)算在內(nèi))。猴子經(jīng)注射后2～4周，再采血1次，分離血清，做中和抗體測定。10只猴中至少要有9只血清表現(xiàn)陽性中和反應(yīng)。在1個(gè)月的觀察期中，發(fā)現(xiàn)腦炎癥狀或因而死亡者不得超過1只猴。
1.3 毒種保存
原毒種和生產(chǎn)毒種批均應(yīng)凍干后真空封口，保存于-70℃以下。
1.4 毒種傳代和生產(chǎn)毒種的制備
取毒種3支，啟開安瓿后立即以稀釋液（不應(yīng)含有任何人體蛋白和外源血清或抗體)溶化。待全部溶化后接種于7日齡雞胚卵黃囊，每胚0.2ml。分2組進(jìn)行，每組不得少于10胚，置37.5～38℃培育。70～80小時(shí)按組收取活存雞胚，每組不得少于4胚。去眼后分組混合研磨，加稀釋液做成懸液，經(jīng)2000r/min離心10分鐘，吸取上清液，在雞胚中傳代，并抽樣按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行無菌試驗(yàn)。按同法連續(xù)傳遞2代，傳代時(shí)可不等無菌試驗(yàn)結(jié)果，第3代毒種的雞胚收獲后，吸取容器內(nèi)液體做無菌試驗(yàn)（方法同上)，并將雞胚凍存于-40℃m.bhskgw.cn以下。將無菌試驗(yàn)陰性之雞胚取出融化。按每胚加入1ml稀釋液研磨，經(jīng)2000r/min離心10分鐘，吸取上清液，加入稀釋液稀釋5倍后置冰浴中待用。同時(shí)做毒力滴定。此代即為生產(chǎn)毒種。
2 疫苗制造
2.1 接種雞胚
用7日齡雞胚，每胚接種適當(dāng)稀釋度毒種液0.1～0.2ml于卵黃囊，接種后滴蠟封口。
2.2 培育
接種后37.5～38℃培育，70～80小時(shí)開始收獲。
2.3 收獲
收獲時(shí)剔去死胚，分組收獲活存雞胚，去眼，裝入大管中，逐管吸取管內(nèi)液體做無菌試驗(yàn)，在操作過程中盛雞胚之大管應(yīng)置冰浴中保冷，收獲完畢置-40℃凍存。
2.4 研磨、離心
2.4.1 研磨
剔除灑菌雞胚，將冰凍雞胚大管置冷水中融化，倒入研磨桶內(nèi)，按每胚1ml加入滅菌雙蒸水，用電動(dòng)研磨機(jī)8000r/min研磨3分鐘。
2.4.2 離心，收取上清液
將研磨后的雞胚懸液以減壓虹吸法分裝于500ml瓶中，塞以膠塞，用2000r/min離心30分鐘。離心應(yīng)在2～5℃進(jìn)行。
收取上清液，每批裝一個(gè)球瓶，換以膠塞，保存在冰浴中。
2.5 半成品檢定
2.5.1 無菌試驗(yàn)
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行
2.5.2 凍干前病毒滴定
吸取球瓶中樣品，作10倍系列稀釋。取10-1～10-6之病毒液，每個(gè)稀釋度用體重10～12g小白鼠6只，每只腦內(nèi)注射0.03ml，接種部位忌用碘酒m.bhskgw.cn/wsj/消毒，觀察21天，計(jì)算LD50。
2.6 分裝
疫苗保存在冰浴中進(jìn)行分裝，每安瓿分裝量為0.5ml（10人份)。分裝后將盛安瓿之金屬盒放入-40～-50℃預(yù)凍2小時(shí)。
2.7 凍干
全部凍干過程為15～17小時(shí)，最后5小時(shí)升溫20～25℃，最高不得超過25℃。凍干后安瓿真空封口。
3 成品檢定
3.1 物理檢查
外觀為略帶粉紅色的疏松體，水分不應(yīng)超過3%（g/g)，加入稀釋液應(yīng)迅速溶解。
3.2無菌試驗(yàn)
按《生物制品無菌試驗(yàn)規(guī)程》進(jìn)行。
3.3 猴體安全及效力試驗(yàn)
方法及要求見1.2.3項(xiàng)，如生產(chǎn)毒種做過猴體安全及效力試驗(yàn)則疫苗可免做。
3.4 豚鼠安全試驗(yàn)
按原分裝量加入生理鹽水溶解疫苗，用體重300～500g豚鼠2只，試驗(yàn)前2～3天每天量體溫、稱體重。然后每只腹腔注射0.5ml，觀察7天，每天量體溫，應(yīng)無病癥發(fā)生。如2只豚鼠均有顯著反應(yīng)（體溫超過40℃，體重減輕)或死亡，則該批疫苗應(yīng)廢棄；如有1只豚鼠有癥癥發(fā)生，可再用3只豚鼠重試，重試中如有2只以上豚鼠發(fā)病時(shí)，判為不合格，制品應(yīng)廢棄；如有1只發(fā)病，則再重試，仍有發(fā)病則判為不合格，制品應(yīng)廢棄。
3.5 病毒滴定
同半成品檢定。每只小白鼠腦內(nèi)注射0.03ml。病毒滴度應(yīng)≥3.66LogLD50。
3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)
由每批疫苗成品取3安瓿，置37℃2周，滴度下降不應(yīng)超過1Log。
3.7 鑒別試驗(yàn)
每亞批成品應(yīng)按1.2.2項(xiàng)進(jìn)行鑒別試驗(yàn)。
3.8 稀釋液
氯化鈉注射液，其質(zhì)量應(yīng)符合《中國藥典》規(guī)定。
4 保存與效期
應(yīng)保存于-20℃，自干燥之日起效期為1年半，如保存于2～8℃，效期為6個(gè)月。
