| 公開(公告)號 | CN1204145C |
| 公開(公告)日 | 2005.06.01 |
| 申請(專利)號 | CN00123041.7 |
| 申請日期 | 2000.09.29 |
| 專利名稱 | 人血管內(nèi)皮細(xì)胞生成抑制因子的制備工藝及其制品在抗腫瘤血管生成治療中的應(yīng)用 |
| 主分類號 | C07K14/475 |
| 分類號 | C07K14/475;C12N15/11;C12P21/00;A61P35/00 |
| 分案原申請?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(專利權(quán))人 | 遼寧衛(wèi)星生物制品研究所(有限公司) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 李忠義;陳林生;劉江秋;孫亦紅;汪軍遠(yuǎn) |
| 地址 | 110044 遼寧省沈陽市大東區(qū)東站街51甲3 |
| 頒證日 | |
| 國際申請 | |
| 進(jìn)入國家日期 | |
| 專利代理機(jī)構(gòu) | 沈陽智龍專利事務(wù)所 |
| 代理人 | 孫吉秀 |
| 國省代碼 | 遼寧;21 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種人血管內(nèi)皮細(xì)胞生成抑制因子—Endostatin的制備工藝，是經(jīng)過基因克隆、酵母菌發(fā)酵和純化過程制備而得，其步驟如下：a.通過PCR方法從人胎兒腎臟細(xì)胞cDNA文庫中篩選得到人膠原蛋白十八--humantypeXVIIIcollagen基因1503至2055cDNA活性片段，首先制備兩種引物分別為CTCGAGAAAAGAGAGGCTCACAGCCAC和GCGGCCGCTTACTACTTGGAGGCAGTC，以人胎兒腎臟細(xì)胞cDNA庫為模板，以PCR條件94℃2分鐘、55℃2分鐘和72℃2分鐘共做30個循環(huán)而得到人血管內(nèi)皮細(xì)胞生成抑制因子—Endostatin的基因片段；b.將該基因克隆入TAVectohk質(zhì)粒中，通過XhoI，NotI兩種內(nèi)切酶酶切，經(jīng)電泳純化得到的基因片段，再克隆入pPICZαA質(zhì)粒中的上述兩種內(nèi)切酶位點(diǎn)中；c.將該基因載體pPICZαA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染于酵母菌中，經(jīng)篩選得到高效基因工程酵母菌株；d.經(jīng)發(fā)酵誘導(dǎo)表達(dá)的菌液采用超濾、濃縮、高速離心、親和柱層析及凝膠過濾等手段純化而得到人重組血管內(nèi)皮細(xì)胞生成抑制因子蛋白質(zhì)；e.將純化得到的人重組血管內(nèi)皮細(xì)胞生成抑制因子Endostatin蛋白加入到含有bFGF的牛腎上腺毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液中，培養(yǎng)3天后通過細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞染色方法，測定抑制毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的活性。 |
| 摘要 | 本發(fā)明屬于基因工程領(lǐng)域，涉及一種人重組血管內(nèi)皮細(xì)胞生成抑制因子的制備方法及其制品在抗腫瘤血管生成治療中的應(yīng)用，它是通過PCR方法從人胎兒腎臟細(xì)胞cDNA文庫中篩選得到的基因片段，通過基因克隆方法在酵母菌中發(fā)酵、表達(dá)、及純化過程得到純品，其具有高效表達(dá)、可溶性、無需復(fù)性、修飾及糖基化的特性，能抑制腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖，對多種腫瘤具有治療作用。 |
| 國際公布 |
