| 公開(kāi)(公告)號(hào) | CN1156582C |
| 公開(kāi)(公告)日 | 2004.07.07 |
| 申請(qǐng)(專(zhuān)利)號(hào) | CN02115452.X |
| 申請(qǐng)日期 | 2002.01.22 |
| 專(zhuān)利名稱(chēng) | 一種篩選具有抗菌活性的肽類(lèi)物質(zhì)的方法 |
| 主分類(lèi)號(hào) | C12Q1/18 |
| 分類(lèi)號(hào) | C12Q1/18 |
| 分案原申請(qǐng)?zhí)? | |
| 優(yōu)先權(quán) | |
| 申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人 | 華中科技大學(xué) |
| 發(fā)明(設(shè)計(jì))人 | 董先智;徐輝碧;黃開(kāi)勛;劉瓊 |
| 地址 | 430074 湖北省武漢市洪山區(qū)珞喻路1037號(hào) |
| 頒證日 | 2004.07.07 |
| 國(guó)際申請(qǐng) | |
| 進(jìn)入國(guó)家日期 | |
| 專(zhuān)利代理機(jī)構(gòu) | 華中科技大學(xué)專(zhuān)利中心 |
| 代理人 | 紀(jì)元;方放 |
| 國(guó)省代碼 | 湖北;42 |
| 主權(quán)項(xiàng) | 一種篩選具有抗菌活性的肽類(lèi)物質(zhì)的方法，該方法的步驟為：A：將蛋白質(zhì)組樣品經(jīng)過(guò)丙酮預(yù)處理以降低雜質(zhì)含量；B：將處理過(guò)的樣品在非變性條件下進(jìn)行等電聚焦IEF，IEF之后從凝膠上切下兩根寬度相同的IEF膠條，在緩沖液A中平衡后進(jìn)行第二向的聚丙烯酰胺凝膠電泳，使用丙烯酰胺及甲叉雙丙烯酰胺制備非變性凝膠，上槽緩沖液的組分為T(mén)ris-base，Tricine和SDS，恒壓電泳至溴酚藍(lán)前緣到達(dá)底部；C：將PAGE所得的兩塊膠分別處理，一塊膠用考馬斯亮藍(lán)CBB染色，脫色后用做備份，另一塊膠則經(jīng)電印跡，將蛋白質(zhì)斑點(diǎn)轉(zhuǎn)移到NC膜上，使用不含SDS的緩沖液A；D：經(jīng)過(guò)0.01～0.2MTris-Cl，pH＝7.5的緩沖液漂洗除去SDS，將NC膜真空干燥；E：在NC膜上均勻地分布細(xì)菌，使其密度達(dá)到1×103～1×105CFU/mm2后，將膜置于牛肉膏固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，該培養(yǎng)基含顯色劑；同時(shí)含有細(xì)菌生長(zhǎng)所需的底物，該底物經(jīng)細(xì)菌代謝能產(chǎn)生酸性產(chǎn)物；在NC膜上正常生長(zhǎng)的細(xì)菌由于其代謝產(chǎn)物呈酸性因而在其周?chē)柿咙S色，而有抗菌肽斑點(diǎn)的地方細(xì)菌生長(zhǎng)受抑制，故而和周?chē)尸F(xiàn)出色差，為暗色的斑點(diǎn)；F：將NC膜上的斑點(diǎn)與雙向電泳所得到的凝膠上的斑點(diǎn)相對(duì)照，將凝膠上對(duì)應(yīng)于NC膜上抗菌肽色斑的斑點(diǎn)切下，然后對(duì)這些斑點(diǎn)用質(zhì)譜指紋圖，N端序列分析，氨基酸組成分析進(jìn)行微量鑒定。 |
| 摘要 | 本發(fā)明提供了一種準(zhǔn)確、快速?gòu)奶烊划a(chǎn)物中篩選具有抑菌生物活性的蛋白質(zhì)多肽類(lèi)物質(zhì)的方法�？朔爽F(xiàn)有技術(shù)不能有效解決篩選速度、通量、準(zhǔn)確率三者統(tǒng)一的弱點(diǎn)。該方法包括了等電聚焦，恒壓電泳，電印跡，細(xì)菌培養(yǎng)及微量鑒定，將高通量的分離方法和高精度的活性鎖定方法結(jié)合起來(lái)，能夠在細(xì)胞水平上直接篩選出具有抑菌生物活性的蛋白質(zhì)或多肽，運(yùn)用該方法每循環(huán)的操作時(shí)間約為一周。 |
| 國(guó)際公布 |
